AXIN1基因的突變與結(jié)腸癌和膠質(zhì)瘤發(fā)生之間的聯(lián)系.pdf

1、Wnt和JNK信號傳導(dǎo)途徑由一系列癌基因和抑癌基因編碼的蛋白質(zhì)組成，各種蛋白間彼此聯(lián)系、相互制約構(gòu)成復(fù)雜的信號傳遞網(wǎng)絡(luò)，在細(xì)胞增殖、分化、運(yùn)動、黏附及機(jī)體發(fā)育等過程中起著重要調(diào)節(jié)作用，該網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)關(guān)系的紊亂與腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系。Axin是一個體軸發(fā)育抑制因子，也是非常重要的腫瘤抑制因子，它有一系列結(jié)合位點(diǎn)，可與這兩種信號傳導(dǎo)途徑中的多個重要成員相互結(jié)合形成復(fù)合物，在復(fù)合物中與其它因子一起共同調(diào)節(jié)兩種信號傳導(dǎo)系統(tǒng)的平衡。Axin還參與p5

2、3、TGF-β等重要信號傳導(dǎo)途徑的調(diào)控。正因?yàn)锳xin在Wnt、JNK、p53等多種信號傳導(dǎo)途徑中參與細(xì)胞生長、增殖、癌變等重要細(xì)胞命運(yùn)的調(diào)節(jié)過程，所以Axin與人類癌癥之間的聯(lián)系引起了人們廣泛的研究興趣。 腫瘤是一種嚴(yán)重危害人體健康的常見疾病。其中結(jié)腸癌是導(dǎo)致死亡的主要癌癥之一，膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤。本論文對54例結(jié)腸癌組織和56例膠質(zhì)瘤組織進(jìn)行了分析，首先通過免疫組化的方法鑒定β-catenin與Axin兩種蛋白

3、水平在這兩種腫瘤組織中是否存在異常。然后我們根據(jù)AXIN1基因的DNA序列，設(shè)計(jì)了覆蓋AXIN1基因所有外顯子序列的23對特異PCR引物，通過PCR-SSCP的方法進(jìn)一步篩選抑癌基因AXIN1可能存在的突變。進(jìn)而構(gòu)建這些突變體的哺乳動物表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染到人類細(xì)胞中，通過熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄活性的檢測、免疫共沉淀、免疫激酶反應(yīng)等生物化學(xué)、分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)手段，鑒定這些突變是否影響了Axin的正常功能，最終確定AXIN1基因的突變

4、與結(jié)腸癌和膠質(zhì)瘤發(fā)生之間的聯(lián)系。 本論文研究發(fā)現(xiàn)： 1、正常結(jié)腸組織中β-catenin染色陰性，沒有β-catenin的積累；37例結(jié)腸癌組織中有59.4﹪(22/37)的組織中存在β-catenin的積累，包括胞漿的積累和轉(zhuǎn)移至胞核的積累；β-catenin的積累在不同級別的結(jié)腸癌中都有很大比例的存在，說明β-catenin的積累在結(jié)腸癌發(fā)生中起著重要作用。 2、正常結(jié)腸組織中Axin染色陽性；37例結(jié)腸癌有

5、62.2﹪(23/37)的組織中Axin免疫組化染色陰性；隨著腫瘤級別的升高，Axin陰性率呈上升的趨勢，說明Axin在結(jié)腸癌起著腫瘤抑制因子的作用。 3、54例結(jié)腸癌中AXIN1基因存在14.8﹪(8/54)的有義/無義點(diǎn)突變，表明AXIN1基因在結(jié)腸癌中存在一定的突變發(fā)生頻率；75﹪(6/8)的AXIN1基因發(fā)生突變的組織中有β-catenin的積累，表明結(jié)腸癌中AXIN1基因的突變與β-catenin的積累有關(guān)。

6、4、正常膠質(zhì)瘤組織中膠質(zhì)細(xì)胞β-catenin染色陰性，沒有β-catenin的積累；56例膠質(zhì)瘤中僅有3.5﹪(2/56)的組織中有β-catenin的積累，表明膠質(zhì)瘤中β-catenin的積累不是導(dǎo)致膠質(zhì)瘤發(fā)生的主要因素。 5、膠質(zhì)瘤癌旁組織中正常膠質(zhì)細(xì)胞Axin染色陰性；Axin在高達(dá)35.7﹪(20/56)的膠質(zhì)瘤膠質(zhì)細(xì)胞中染色陽性，表明Axin水平異常與膠質(zhì)瘤的發(fā)生有關(guān)。 6、29例膠質(zhì)瘤中AXIN1基因存在高

7、達(dá)34.4﹪(10/29)的有義點(diǎn)突變，而且多發(fā)生在DIX結(jié)構(gòu)域，表明Axin的DIX結(jié)構(gòu)域在膠質(zhì)瘤發(fā)生中的重要性；高級別的膠質(zhì)瘤Axin染色陽性率高，發(fā)生突變的頻率也高，說明在膠質(zhì)瘤中AXIN1基因突變與Axin蛋白水平增高和膠質(zhì)瘤的發(fā)生有關(guān)。 7、結(jié)腸癌和膠質(zhì)瘤中由于AXIN1基因發(fā)生點(diǎn)突變導(dǎo)致Axin功能發(fā)生改變的比率都高達(dá)80﹪以上，通過Wnt、JNK或者p53信號途徑，不同程度、不同方式地影響Axin的正常功能。