可逆性組蛋白乙酰化修飾在人WT1基因轉錄調控中的作用及其分子機制研究.pdf

1、本論文旨在確定可逆的組蛋白乙?；揎検欠駞⑴cWT1基因的轉錄調控,并試圖探討其分子機制.通過一系列瞬時轉染和相對熒光素酶活性分析以及RT-PCR實驗,我們發(fā)現(xiàn)組蛋白乙酰轉移酶p300/CBP不僅能促進WT1啟動子和內部增強子的活性,而且能提高內源WT1 mRNA的表達水平.E1A蛋白能抑制p300對WT1報告基因轉錄激活的促進作用,而其突變體E1A delta 2-36因不能與p300/CBP結合而沒有這種作用,這也間接地證明了p300

2、/CBP能促進WT1基因的表達.我們的結果還表明p300/CBP可分別與轉錄因子Sp1、c-Myb和Ets-1協(xié)同地促進WT1報告基因的轉錄活性.通過WT1內部增強子克隆方向不同的質粒,我們證明p300/CBP促進WT1報告基因的轉錄激活不受內部增強子方向的影響.此外,通過采用HAT區(qū)缺失突變的p300表達質粒的轉染實驗,我們證明了p300/CBP的組蛋白乙酰轉移酶活性在WT1基因轉錄調控過程中發(fā)揮重要作用.通過染色質免疫沉淀實驗(Ch

3、Ip),我們發(fā)現(xiàn)p300/CBP能夠提高WT1內部增強子處組蛋白H3的乙酰化水平.另外,我們的結果表明另一種組蛋白乙酰轉移酶P/CAF不僅能促進WT1報告基因的表達,而且在此過程中與p300/CBP具有協(xié)同作用.在它們協(xié)同地促進WT1報告基因表達的過程中,p300/CBP和P/CAF的HAT活性都非常重要.另一方面,我們驗證了六種人組蛋白去乙?；?HDAC1-6)對WT1報告基因表達水平的影響.結果表明,HDAC4和HDAC5不僅能抑