基于GC-MS檢測不同輸液量救治失血性休克的差異代謝物及其死因鑒定的研究.pdf

1、目的：
　　失血性休克是法醫(yī)鑒定和臨床上常見的休克類型之一，如不及時救治，可威脅生命，往往涉及治安、刑事案件。法醫(yī)鑒定實踐中，時有發(fā)現(xiàn)在臨床救治失血性休克過程中，存在過度輸液死亡的案例。因此，本課題擬建立兔失血性休克模型，探討不同輸液量救治的療效及其重要器官組織的病變和代謝物變化，篩選具有鑒別價值的生物標志物及其組合，為失血性休克及其過度輸液的死亡機理研究提供依據(jù)，為失血性休克的相關法醫(yī)鑒定和臨床救治提供科學依據(jù)。
　　方法

2、：
　?、攀а孕菘四Ｐ停?7只新西蘭兔，1.5-2.5kg。隨機分成3組：不輸液組14只（A組）、常規(guī)輸液組11只（B組）、過度輸液組12只（C組）。觀測血壓、心電、呼吸等生理功能指標和機體反應情況，期間死亡者歸為各自死亡組，存活的于5h時斷頸處死。留取造模前、造模成功（放血至血壓35-45mmhg）時、死后血液各5ml，離心取血清-80°冰箱保存。立即尸體解剖取腦、心、肺、肝、腎，觀察大體形態(tài)，測量重量、體積，計算密度，各器官

3、組織一半用于常規(guī)HE組織切片染色，一半用于代謝組學檢測。⑵代謝組學分析：GC-MS檢測氨基酸等代謝物譜，PCA、PLS-DA建模，觀察代謝輪廓， NIST庫代謝物定性，相對含量用t檢驗判斷差異顯著性。MedCalc軟件繪制計算代謝物的受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC曲線）及其曲線下的面積（Area Under Curve，AUC）；MDR軟件進行層次聚類分析，挑選

4、聚類較高的回歸分析，確定AUC得分高的標志物組合。
　　結果：
　　①成功建立兔失血性休克模型，A組、B組、C組死亡率分別為85.7％、0、83.3%，觀察5h內的各組存活時間分別為68.92±7.30min、300±0.00min、171.42±4.09min，過度輸液與不輸液組死亡率無統(tǒng)計學意義，過度輸液組存活時間顯著高于不輸液組。②血清差異性代謝物（P<0.05且VIP>1）：失血性休克與正常血清對照：丙氨酸、纈氨酸、

5、亮氨酸、苯丙氨酸、琥珀酸、丁二酸、嘌呤均顯著升高，棕櫚酸、亞油酸、反油酸均顯著降低；B組與A組比較：氨基甲酸酯、異檸檬酸顯著升高，丙氨酸、琥珀酸、延胡索酸、磷酸、脯氨酸、天門冬氨酸、丁二酸、次黃嘌呤、谷氨基酸均顯著降低；C組與A組比較，乳酸、乙酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、尿素、亮氨酸、絲氨酸、琥珀酸、延胡索酸、磷酸、脯氨酸、蛋氨酸、天門冬氨酸、蘇氨酸、二羧酸、苯丙氨酸、丁二酸、半胱氨酸、次黃嘌呤、谷氨基酸、亞油酸、反油酸、硬脂酸、檸檬酸

6、、酪氨酸、嘌呤、膽固醇均降低；氨基甲酸酯升高；C組與B組比較，甘氨酸、丙二酸鹽、纈氨酸、尿素、異檸檬酸、蛋氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、亞油酸、反油酸、硬脂酸、檸檬酸鹽、酪氨酸、膽固醇均降低，次黃嘌呤升高。③肝臟差異代謝物（P<0.05且VIP>0.75）：B組與A組比較，乳酸、磷酸、脯氨酸、谷氨酸、棕櫚酸、亞油酸、硬脂酸、升高，尿素則相反；C組與B組比較，乳酸、尿素、磷酸、谷氨酸、棕櫚酸、亞油酸、硬脂酸、甘氨酸降低。④差異代謝物的鑒別潛能：

7、失血性休克早期與正常血清、常規(guī)輸液與不輸液、過度輸液與不輸液、常規(guī)輸液與過度輸液的血清鑒別價值高的代謝物組合分別為反油酸、琥珀酸、亮氨酸、苯丙氨酸，谷氨基酸、天門冬氨酸、丙氨酸，甘氨酸、亞油酸、檸檬酸，檸檬酸、亞油酸、異檸檬酸、蘇氨酸、甘氨酸。失血性休克AUC0.914，特異性92.0%，靈敏度為89.3%，后三者AUC1，特異性100%，靈敏度為100%；常規(guī)輸液與過度輸液組肝組織中尿素鑒別價值高，AUC1，特異性100%，靈敏度為1

8、00%。
　　結論：
　?、沤⒘送妙i動脈放血、耳緣靜脈輸液失血性休克模型，成功率高、重復性好、操作性強。⑵血清中差異性代謝物組合，可指導法醫(yī)實踐中鑒別失血性休克、不同輸液情況，同時可以指導臨床救治失血性休克，肝組織中尿素可以單獨作為鑒別指標。腦、心組織的代謝物輪廓差異性小，診斷價值不高。⑶常規(guī)輸液量救治失血性休克可有效地調動機體代償性代謝，實現(xiàn)顯著的救治療效。不輸液組和過度輸液組，代謝標記物和存活時間差異顯著，提示兩者存在