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文檔簡介
1、為探索安全高效的新型動物分子免疫增強劑，本實驗設(shè)計了一新型CpG寡聚脫氧核苷酸(oligodeoxynucleotide，ODN)，包含11個CpG基序，同時設(shè)計一對引物，在其兩端引入PstⅠ酶切位點。應(yīng)用PCR技術(shù)擴增CpGODN，回收純化后以MTT法體外檢測其對動物血液淋巴細胞的刺激增殖活性。用離子交聯(lián)法制備了殼聚糖納米顆粒(CNP)，探索了CNP包裝CpG和介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染動物細胞的特征。用此CNP包裹CpGODN，聯(lián)合副傷寒疫苗或
2、單獨接種21日齡昆明小鼠后，每周尾靜脈采血用ELISA分析免疫小鼠IgG、IgA、IgM、IL2、IL4和IL6水平，檢測淋巴細胞、單核細胞、粒細胞和白細胞數(shù)量的變化，，觀察此CpGODN及其殼聚糖納米顆粒包裝后對小鼠免疫應(yīng)答及免疫保護的調(diào)節(jié)作用。接著將此CpG用PstⅠ酶切后與質(zhì)粒VR1012連接，構(gòu)建新型免疫刺激分子CpG-VR1012。酶切鑒定結(jié)果表明CpG分子與VR1012連接成功。同樣制備殼聚糖納米顆粒并免疫小鼠。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)
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