瘦素對VSMCs環(huán)氧合酶-2及其產(chǎn)物表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　脂肪細胞分泌的瘦素與高血壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但機制不完全清楚。本研究采用不同濃度瘦素相同時間作用于大鼠主動脈平滑肌細胞（VSMCs），觀察瘦素對其環(huán)氧合酶-2（COX-2）及下游產(chǎn)物血栓素A2和前列環(huán)素的影響，以探討瘦素介導(dǎo)的高血壓的發(fā)病機制。
　　方法：
　　采用組織貼壁法原代培養(yǎng)VSMCs；通過免疫熒光組化檢測VSMCs內(nèi)特異性蛋白平滑肌肌動蛋白（α-actin）以鑒定VSMCs，不同濃度瘦素（10-

2、7、10-8、10-9、10-10、10-11M）同一時間（48h）作用于VSMCs后，實時熒光定量PCR檢測VSMCs的COX-2mRNA的相對表達；Westernblot檢測各組COX-2蛋白的相對表達；酶聯(lián)免疫吸附測定（Elisa）檢測各組細胞上清液中6-酮前列腺素(6-KetoPGF1α)和血栓素B2(TXB2)的分泌程度。
　　結(jié)果：
　　1、VSMCs培養(yǎng)7天后，組織邊緣萌發(fā)出少量細胞，呈長梭形和多邊形，培養(yǎng)15

3、天后，細胞呈明顯的“波峰波谷”樣改變。
　　2、免疫熒光檢測見培養(yǎng)的細胞漿中有特異性表達α-actin蛋白，通過計算得到表達α-actin的細胞陽性率為90％，即培養(yǎng)的VSMCs的純度達90%。
　　3、與對照組(PBS處理)相比較,各梯度濃度瘦素處理48小時后，VSMCs的COX-2mRNA及蛋白相對表達量均明顯升高（P<0.05）,而在低中濃度瘦素水平時（10-11M、10-10M、10-9M）隨著濃度增加COX-2呈逐

4、漸上升趨勢（10-10M相當(dāng)于生理濃度），當(dāng)瘦素水平達高濃度（10-8M、10-7M）后VSMCs的COX-2mRNA及蛋白二者相對表達量逐漸降低（10-9M為出現(xiàn)瘦素抵抗的濃度）。
　　4、細胞上清液中6-KetoPGF1α水平的表達趨勢與COX-2基本一致，即與對照組(PBS處理)相比較,各梯度濃度瘦素處理48小時后，VSMCs分泌的6-KetoPGF1α蛋白表達量均明顯升高（P<0.05）,而在低中濃度瘦素水平時（10-11

5、M、10-10M、10-9M）隨著濃度的增加6-KetoPGF1α呈逐漸上升趨勢；當(dāng)瘦素水平達高濃度后（10-8M、10-7M），6-KetoPGF1α表達量反而下降。可能的原因：①瘦素毒性作用，促進平滑肌的壞死和凋亡，降低COX-2和6-KetoPGF1α的表達；②瘦素抵抗，有研究認為瘦素在體內(nèi)超過一定濃度時，反饋性的下調(diào)瘦素受體的表達。
　　5、細胞上清液中TXB2的表達無顯著差異，TXB2/6-KetoPGF1α比值也無顯著

6、差異，因此瘦素對VSMCs分泌的TXB2及TXB2/6-KetoPGF1α無顯著影響(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　瘦素明顯增加VSMCs的炎癥因子COX-2表達，這可能與高血壓（是一種慢性炎癥疾?。┑陌l(fā)生發(fā)展有關(guān)；瘦素明顯增加COX-2的下游產(chǎn)物舒張血管物質(zhì)6-KetoPGF1α的表達，這又利于血壓下降，說明瘦素對VSMCs的作用具有復(fù)雜性；選擇性COX-2抑制劑因在抑制COX-2的同時也可能抑制其下游6-KetoPG