NogoA-PirB通路對腦出血大鼠軸突再生和神經(jīng)功能的影響.pdf

1、目的：通過構建大鼠腦出血模型，觀察NogoA和PirB兩種蛋白在腦出血大鼠腦組織中不同時間點的定量表達、PirB表達的時空特點、軸突再生情況、大鼠神經(jīng)功能缺損情況，探討PirB的表達對腦出血損傷大鼠軸突再生和神經(jīng)功能的影響、NogoA和PirB蛋白表達的相關性，推測NogoA-PirB通路與神經(jīng)功能缺損的相關性，探討腦出血損傷后腦組織的修復機制，進一步探索腦出血后治療靶點，為臨床治療研究提供理論依據(jù)。
　　方法：雄性SD大鼠75只

2、，隨機分為假手術（Sham）組（n=25）和腦出血（ICH）組（n=50），兩組分別按斷頭取腦時間點不同分為1d、3d、7d、14d、28d共5個亞組，各時間點腦出血大鼠隨機分為Western Blot組和組織免疫熒光組。Sham組大鼠顱骨鉆孔后不注射血液，腦出血組以大鼠自體鼠尾動脈不凝血50ul，經(jīng)改良二次注入法建立大鼠腦出血模型，術后3小時通過神經(jīng)功能評分判定造模成功與否。造模成功后，各時間點大鼠采用Garcia神經(jīng)功能障礙評分方法

3、進行評分后斷頭取腦。Western Blot組腦組織取出后立即液氮冷凍，隨后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱凍存?zhèn)溆?，研磨組織提取蛋白后，采用蛋白免疫印跡法（Western-blot）測定PirB和NogoA蛋白的表達；組織免疫熒光組大鼠深度麻醉后予以PBS和4％多聚甲醛灌注后取腦，取出腦組織經(jīng)后續(xù)處理后行石蠟切片和冰凍切片，分別行HE染色和免疫熒光。
　　結(jié)果：（1）、腦出血組神經(jīng)功能缺失評分明顯低于對應時間點Sham組，以3d組神經(jīng)功能缺失評

4、分最低，以上結(jié)果統(tǒng)計學差異具有顯著性(P<0.05)。（2）腦組織形態(tài)結(jié)構改變：Sham組腦組織中可見神經(jīng)細胞完整。腦出血組1d亞組病灶內(nèi)充滿紅細胞，病灶周圍水腫明顯伴少量炎細胞浸潤；3d亞組血腫紅細胞減少，病灶周圍神經(jīng)元腫脹壞死明顯，大量炎細胞浸潤；7d亞組血腫進一步吸收，周圍水腫有所減輕，炎細胞減少，膠質(zhì)細胞大量增生；14d、28d亞組血腫吸收，見明顯膠原纖維增生及修復瘢痕。（3）NogoA和PirB定量分析：腦出血組各時間點Nog

5、oA、PirB表達均高于對應時間點的Sham組；二者在腦出血后表達明顯增加，并在腦出血后7天達到表達高峰，持續(xù)高水平表達至28d，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。（4）、雙標免疫熒光：PirB在腦出血組各時間點均有表達，主要表達在神經(jīng)元細胞、軸突及星形膠質(zhì)細胞；腦出血組出現(xiàn)明顯軸突斷裂、紊亂等損傷表現(xiàn)，軸突長度較正常對照組明顯縮短，持續(xù)至腦出血后28天無明顯改善，與Sham組差異具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（5）、腦出血組各時間