紫甘薯花青素對酒精性肝損傷和對肝癌的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　通過前期對亞油酸、鴕鳥油、亞油酸甲酯、鴯鹋油和紫甘薯花青素進(jìn)行抗炎活性的篩選，確定以紫甘薯花青素為主要研究對象，探討紫甘薯花青素對慢、急性酒精性肝損傷，以及體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞SNU-387的影響及其可能的機(jī)制。
　　方法:
　　利用乙醇制備小鼠慢、急性酒精性肝損傷模型，用不同終濃度紫甘薯花青素灌胃給藥，通過體征觀察，臟器指數(shù)測定，AST、ALT、ADH和GRAC等生化指標(biāo)的檢測以及肝臟組織HE染色病理切片

2、的分析，觀察紫甘薯花青素對酒精肝損傷的防治功能。
　　在不同終濃度紫甘薯花青素處理下，利用MTT法和Hoechst33258染色法，對人肝癌細(xì)胞SNU-387活力進(jìn)行測定，狀態(tài)進(jìn)行觀測;通過測定細(xì)胞TNF-α含量來考察死亡受體TNFR1介導(dǎo)的外源性凋亡通路的作用;應(yīng)用信號通路阻斷劑PDTC和SB203580，通過測定細(xì)胞內(nèi)Caspase-8表達(dá)量變化來考察NF-κB和MAPK信號通路的作用。
　　在不同終濃度紫甘薯花青素處理

3、下，利用H2DCFDA染色法，通過倒置相差顯微鏡和生化多功能酶標(biāo)儀對人肝癌細(xì)胞SNU-387內(nèi)活性氧的含量進(jìn)行測定;同時，對細(xì)胞內(nèi)SOD的活力進(jìn)行測定;應(yīng)用活性氧猝滅劑N-乙酰半胱氨酸和信號通路阻斷劑，通過測定細(xì)胞內(nèi)Caspase-8表達(dá)量變化來考察活性氧對信號通路的影響。
　　結(jié)果:
　　在慢性酒精性肝損傷實驗中，模型組血清AST、ALT活力及肝臟、脾臟指數(shù)升高，肝勻漿ADH含量及腎臟指數(shù)降低;與模型組比較，紫甘薯花青素劑

4、量組血清AST、ALT活性及肝、脾指數(shù)降低，ADH含量及腎臟指數(shù)增加;肝臟組織HE染色病理切片顯示紫甘薯花青素劑量組細(xì)胞腫脹消退，結(jié)構(gòu)恢復(fù)完整;同時，對核黃素的含量水平基本不產(chǎn)生影響。
　　在急性酒精性肝損傷實驗中，模型組血清中的AST、ALT活力升高，肝臟勻漿中ADH含量水平降低;與模型組比較，紫甘薯花青素劑量組血清AST、ALT活性降低，肝臟勻漿中ADH含量水平增加，幅度相比于慢性酒精性肝損傷時低。
　　在細(xì)胞凋亡實驗中

5、，結(jié)果表明，不同終濃度紫甘薯花青素作用下，人肝癌細(xì)胞SNU-387活力降低，出現(xiàn)核固縮等凋亡特征，細(xì)胞內(nèi)TNF-α含量和Caspase-8表達(dá)量提高;在阻斷劑PDTC作用下，Caspase-8表達(dá)量無差異;在阻斷劑SB203580作用下，Caspase-8表達(dá)量下降。
　　在活性氧實驗中，結(jié)果表明，不同終濃度紫甘薯花青素作用下，人肝癌細(xì)胞SNU-387內(nèi)活性氧含量升高，SOD活性降低;應(yīng)用活性氧猝滅劑N-乙酰半胱氨酸，Caspas

6、e-8表達(dá)量降低;在阻斷劑PDTC作用下，Caspase-8表達(dá)量無差異;在阻斷劑SB203580作用下，Caspase-8表達(dá)量下降。
　　結(jié)論:
　　紫甘薯花青素可以降低小鼠血清中AST、ALT活力，提高肝臟勻漿中ADH含量，細(xì)胞腫脹消退，維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)，核黃素營養(yǎng)狀況不受影響;在酒精戒斷下的防治效果優(yōu)于持續(xù)飲酒下的防治效果;可以通過死亡受體TNFR1介導(dǎo)的外源性凋亡通路和MAPK信號通路參與介導(dǎo)肝癌細(xì)胞SNU-387的凋