性別差異對(duì)小鼠酒精性肝損傷影響的分子機(jī)制.pdf

1、目的：
　　本課題主要研究酒精誘導(dǎo)不同性別的小鼠肝損傷過程中，肝細(xì)胞應(yīng)激、增殖、凋亡和代謝等因子的表達(dá)差異，闡明性別對(duì)小鼠酒精性肝損傷影響的分子機(jī)制。
　　方法：
　　健康昆明小鼠120只，雌雄各半，三組雌性組(每組20只)和三組雄性組（每組20只），分組如下：正常飼養(yǎng)組（normal feeding,NF），正常飼養(yǎng)加蒸餾水灌胃組（normal feeding plus water,NFW）和正常飼養(yǎng)加酒精56％（v

2、/v）灌胃組(0.15mL/10g)（normal feeding plusethanol,NFE）連續(xù)灌胃4周；酒精灌胃四周末，進(jìn)行眼球采血，分離血清，測(cè)定血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase,ALT）的含量變化。頸椎脫臼處死小鼠取肝臟。分為三份：一份用10%多聚甲醛4℃固定過夜用于組織學(xué)分析，如下：蘇木精-伊紅染色檢測(cè)各組間小鼠

3、肝細(xì)胞的損傷情況；過碘酸雪夫試劑染色檢測(cè)各組間小鼠肝細(xì)胞糖原的表達(dá)情況；苦味酸-天狼星紅染色法檢測(cè)各組間小鼠肝組織膠原纖維的表達(dá)情況；Hoechst33258染色檢測(cè)各組間肝細(xì)胞的凋亡情況；一份用于制作冰凍切片，進(jìn)行油紅 O染色，檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)變化；一份研磨后提取蛋白用作蛋白印跡檢測(cè)，應(yīng)激因子（heat shock protein27,HSP27）、（heat shock protein70,HSP70），磷酸化的信號(hào)轉(zhuǎn)錄因子-3（

4、phosphorylation of signal transcription factors-3,p-STAT-3），轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factor-βl,TGF-βl），增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA），半胱蛋白酶-3（Caspase cystenyl-aspartate-specific protease,Caspase-3）、Bc

5、l-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、Bcl-2（Bcl-2）及代謝關(guān)鍵酶細(xì)胞色素P4502E1（cytochrome P4502E1,CYP2E1）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　酒精灌胃四周末，雌性和雄性小鼠肝損傷情況：
　　1.雌性小鼠與雄性小鼠相比，血清中AST、ALT水平顯著升高(P＜0.01)。
　　2.蘇木精-伊紅染色情況：雌性小鼠肝細(xì)胞壞死程度顯著高于雄性

6、小鼠(P＜0.01)。
　　3.過碘酸雪夫試劑染色結(jié)果：雄性小鼠肝臟糖原的含量高于雌性小鼠(P＜0.05)。
　　4.苦味酸-天狼星紅染色結(jié)果：與雄性小鼠相比，雌性小鼠出現(xiàn)嚴(yán)重的肝纖維化(P＜0.01)。
　　5.Hoechst33528染色情況：雌性小鼠比雄性小鼠肝細(xì)胞凋亡的數(shù)目多(P＜0.01)。
　　6.油紅O染色結(jié)果：雌性小鼠肝細(xì)胞脂肪變性程度高于雄性小鼠(P＜0.01)。
　　7.蛋白印跡結(jié)果：與