姜黃素對硝普鈉誘導(dǎo)的兔軟骨細(xì)胞凋亡的作用與機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　觀察姜黃素對軟骨細(xì)胞存活及凋亡的影響，探討姜黃素抗骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡，保護(hù)軟骨組織的作用及可能機(jī)制。
　　方法:
　　體外分離培養(yǎng)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，并對其生長特點(diǎn)和形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行觀察;應(yīng)用CCK-8法測定不同濃度的姜黃素對軟骨細(xì)胞存活率的影響;制備硝普鈉(sodium nitroprusside，SNP)誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡模型，硝酸酶還原法和流式細(xì)胞術(shù)分別觀察姜黃素對培養(yǎng)基中一氧化氮(nitric ox

2、ide，NO)含量及軟骨細(xì)胞細(xì)胞凋亡率的影響;Western blot法檢測相關(guān)蛋白Caspase-3、GSK-3β及β-catenin的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　(1)在12 h時(shí)，80，160μmol·L-1的姜黃素已顯現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性，與對照組比較有非常顯著的差異(P＜0.01)，40μmol·L-1的姜黃素對細(xì)胞存活率的影響弱于80，160μmol·L-1組，但與對照組相比，已有顯著的差異(P＜0.05)。在24

3、 h和48 h時(shí)，40μmol·L-1的姜黃素的細(xì)胞毒性隨著時(shí)間的遞增而增強(qiáng)，其細(xì)胞存活率與對照組之間有非常顯著差異(P＜0.01)。2.5，5，10，20μmol·L-1各個(gè)濃度的姜黃素在48 h內(nèi)均未見明顯的細(xì)胞毒性（P＞0.05），且各組之間無顯著性差異（P＞0.05）。
　　(2)姜黃素中劑量組培養(yǎng)基中的NO含量下降最為明顯，與模型組對比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。姜黃素高劑量組與低劑量組中NO雖有下降的趨勢，但

4、與模型組相比，無顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。高劑量的姜黃素對于軟骨細(xì)胞凋亡率的降低作用最強(qiáng)，與模型組和中、低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;低劑量組與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　(3) Western blot結(jié)果顯示:模型組的Caspase-3，GSK-3β和β-catenin蛋白表達(dá)水平明顯高于正常組(P＜0.01)，姜黃素高劑量組的Caspase-3，GSK-3β和β-cateni

5、n表達(dá)與模型組比較明顯減少(P＜0.05或P＜0.01)，中劑量組的Caspase-3和β-catenin蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)，而低劑量組的蛋白表達(dá)水平雖有下降趨勢，但與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)在不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)，各個(gè)濃度的姜黃素都未見對軟骨細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用。姜黃素對體外培養(yǎng)的兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞存在一定的安全濃度范圍（0-20μmol·L-1），超過40μmol·L-

6、1的濃度存在明顯的細(xì)胞毒性，且作用時(shí)間越長，細(xì)胞的存活率越低。
　　(2)體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞在凋亡過程中可釋放大量NO至培養(yǎng)基中。姜黃素可下調(diào)凋亡軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基中的NO含量，抑制SNP誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡。中劑量的姜黃素在降低培養(yǎng)基中NO含量方面優(yōu)于其他干預(yù)組，而高劑量姜黃素對軟骨細(xì)胞凋亡的抑制作用更為顯著。
　　(3)Wnt/β-catenin信號通路可能參與了軟骨細(xì)胞凋亡的過程，姜黃素能抑制體外SNP誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡，其