川芎嗪對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的兔原代軟骨細(xì)胞生長與凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　通過IL-1β誘導(dǎo)兔原代軟骨細(xì)胞，模擬OA時(shí)軟骨細(xì)胞所處的病理環(huán)境，觀察川芎嗪對(duì)兔原代軟骨細(xì)胞的活力及iNOS、NO的表達(dá)差異，探討川芎嗪對(duì)IL-1β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞增殖與凋亡的影響，為川芎嗪應(yīng)用于臨床防治骨性關(guān)節(jié)炎軟骨的進(jìn)行性退變提供實(shí)驗(yàn)與理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組、IL-1β10ng/ml組、IL-1β10ng/ml+TMP5ug/ml組、IL-1β10ng/ml+TMP10ug/ml

2、組、IL-1β10ng/ml+TMP15ug/ml組及IL-1β10ng/ml+TMP20ug/ml組。
　　2.應(yīng)用機(jī)械-酶聯(lián)消化法取軟骨細(xì)胞，構(gòu)建體外原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系，進(jìn)行軟骨細(xì)胞鑒定。
　　3.用IL-1β10ng/ml和/或不同濃度川芎嗪共培養(yǎng)兔原代軟骨細(xì)胞48h后，用流式細(xì)胞儀檢測軟骨細(xì)胞生長周期及凋亡率；用MTT法檢分別24h、48h及72h的軟骨細(xì)胞的生長活力。
　　4.實(shí)驗(yàn)分組處理48h后用RT-P

3、CR和免疫組化檢測iNOS基因及蛋白表達(dá)；用硝酸還原法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液NO的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.鏡下軟骨細(xì)胞貼壁后變形呈三角形或多角形，有明顯突起，核仁明顯。甲苯胺藍(lán)染色于胞質(zhì)中可見蛋白多糖異染為藍(lán)紫色顆粒，胞漿有紅色Ⅱ型膠原熒光表達(dá)，少見于胞核。
　　2.用IL-1β10ng/ml和/或不同濃度(5，10，15，20ug/ml)川芎嗪共培養(yǎng)兔原代軟骨細(xì)胞48h后，與對(duì)照組比較，IL-1β誘導(dǎo)下軟骨細(xì)胞被明顯

4、阻滯在G1期，并且生長活力明顯下降(P<0.01)；加入川芎嗪能明顯降低IL-1β對(duì)軟骨細(xì)胞G1期的阻滯作用，細(xì)胞增殖指數(shù)、細(xì)胞活力明顯增加(P<0.05或P<0.01)。
　　3.用IL-1β10ng/ml和/或不同濃度(5，10，15，20ug/ml)川芎嗪共培養(yǎng)兔原代軟骨細(xì)胞48h后，與對(duì)照組比較，IL-1β誘導(dǎo)下軟骨細(xì)胞的凋亡率顯著增加，明顯上調(diào)軟骨細(xì)胞iNOS和NO的表達(dá)，均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，IL-1β