筋骨痹痛湯藥物血清對IL-1β誘導的兔軟骨細胞凋亡的保護作用.pdf

1、目的：深入研究骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制，研究中藥組方筋骨痹痛湯（獨活寄生湯加骨碎補、續(xù)斷、淫羊霍）含藥血清對軟骨細胞體外培養(yǎng)增殖、分化過程的影響。探討中醫(yī)藥治療骨關(guān)節(jié)炎的機理，以及軟骨細胞體外培養(yǎng)的分化規(guī)律，為中醫(yī)“腎主骨生髓，主生長發(fā)育”提供實證，為人工調(diào)控骨骼形成、退化和骨組織修復提供理論基礎(chǔ)。觀察筋骨痹痛湯藥物血清對白細胞介素-1β（ IL-1β）誘導的兔軟骨細胞Bcl-2、Bax表達及細胞凋亡的影響，以及筋骨痹痛湯治療骨性關(guān)節(jié)炎的機制

2、。
　　方法：隨機取雄性成年新西蘭兔8只分成4組，分別灌服生理鹽水、補肝腎中藥（骨碎補、續(xù)斷和淫羊霍）、獨活寄生湯和筋骨痹痛湯，分別采血，并提取制得空白血清、補肝腎中藥血清、獨活寄生湯血清和筋骨痹痛湯藥物血清。分離制備幼兔軟骨細胞，采用甲苯胺藍染色和 II型膠原免疫熒光法鑒定軟骨細胞。取第三代軟骨細胞，隨機分五組實驗：空白組（A組）、模型組（B組）、補肝腎中藥對照組（C組）、獨活寄生湯對照組（D組）、筋骨痹痛湯組（E組）。A組用含

3、10％空白血清的DMEM培養(yǎng)36h，其余各組均先采用含IL-1β的DMEM誘導培養(yǎng)12h，然后B、C、D、E組分別給予含10%空白血清、10%補肝腎中藥藥物血清、10%獨活寄生湯藥物血清、10%筋骨痹痛湯藥物血清的DMEM培養(yǎng)24h。反轉(zhuǎn)錄實時定量PCR和免疫印跡法檢測兔軟骨細胞Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表達，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡比例。
　　結(jié)果：經(jīng)鑒定分離制備的細胞為軟骨細胞。軟骨細胞培養(yǎng)24小時后，C、D、E組Bcl

4、-2 mRNA和蛋白表達高于B組，D、E組高于C組，E組高于D組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；Bax mRNA和蛋白表達，以及軟骨細胞凋亡率，C、D、E組低于B組，D、E組低于C組，E組低于D組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：補肝腎中藥血清、獨活寄生湯血清、筋骨痹痛湯藥物血清對IL-1β誘導的兔軟骨細胞凋亡均具有保護作用，但是以筋骨痹痛湯藥物血清的作用最為顯著，其機制可能是通過促進Bcl-2表達和抑制Ba