縫隙連接蛋白Cx45、Cx40及TNF-a在梗死心肌中表達(dá)及作用.pdf

1、目的：
　　在法醫(yī)檢案中猝死日益增多,對猝死的研究已經(jīng)有了足夠重視。心源性猝死（Sudden Cardiac Death,SCD）在成人的猝死原因中占首位。急性心肌梗死(AcuteMyocardial Infaction,AMI)發(fā)生惡性的、致命性的心律失常是心源性猝死的主要原因之一。急性心肌梗死(AMI)是冠狀動(dòng)脈急性、持續(xù)性缺血缺氧所引起的心肌壞死。在法醫(yī)鑒定中,有部分心源性猝死者雖然通過系統(tǒng)尸檢及組織形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)仍無法明確具體

2、死因,所以,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)和研究梗死心肌中的標(biāo)志物的表達(dá)、變化及作用,了解標(biāo)志物與心肌梗死后惡性、致命性心律失常的關(guān)系,可以為法醫(yī)學(xué)診斷提供非常重要的線索和依據(jù)。
　　心肌組織中縫隙連接蛋白(Connexin,Cx)是一個(gè)大家族,包括許多種類,分子量在26～56KD之間,其維持著不同心肌細(xì)胞間的“電偶聯(lián)”功能的正常進(jìn)行,參與心肌細(xì)胞間電興奮的形成、化學(xué)信號的傳遞,維持器官功能正常運(yùn)行。本實(shí)驗(yàn)將通過免疫組化法及qRT-PCR檢測縫隙連接

3、蛋白45（Connexin45,Cx45）、縫隙連接蛋白40（Connexin40,Cx40）及腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF-a)在梗死心肌中的表達(dá)情況,探討三者的作用及相關(guān)性,希望可以以此為法醫(yī)學(xué)中心源性猝死死因診斷提供更科學(xué)、準(zhǔn)確的診斷手段。
　　方法：
　　1.收集大連醫(yī)科大學(xué)臨床病理研究中心2013-2015年尸檢標(biāo)本,從中選取由于猝死造成的死亡病例共80例。本實(shí)驗(yàn)共分為三組:a

4、、早期心肌缺血猝死組30例;b、晚期心肌梗死猝死組30例;c、正常心肌組20例。部分實(shí)驗(yàn)的心肌組織樣本通過福爾馬林溶液10％固定,再對各組標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋,免疫組化染色;部分組織為尸檢后凍存的心肌標(biāo)本,-80℃低溫保存,以備提取mRNA用。
　　2.本實(shí)驗(yàn)主要采用免疫組織化學(xué)的方法,通過DAB染色法檢測不同分組心肌組織中Cx45、Cx40以及TNF-a蛋白的表達(dá)。
　　3.提取新鮮心肌組織中的mRNA,利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測

5、各組心肌中Cx45、Cx40以及TNF-amRNA的表達(dá)情況。
　　4.采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析Cx45、Cx40及TNF-a三者的表達(dá)情況及其相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.Cx45在三組心肌中的表達(dá)
　　Cx45在三組心肌組織中表達(dá)均為陽性表達(dá)。正常心肌組、早期心肌缺血猝死組、晚期心肌梗死猝死組中陽性表達(dá)率分別為80％、90％、96.7％。兩個(gè)猝死組Cx45表達(dá)高于正常心肌組,與正常心肌組比較存在顯著差

6、異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.Cx40在三組心肌中的表達(dá)
　　Cx40在三組心肌組織中表達(dá)均為陽性。正常心肌組、早期心肌缺血猝死組和晚期心肌梗死猝死組陽性表達(dá)率分別為85％、60％、20％。兩個(gè)猝死組中Cx40的表達(dá)較正常心肌組明顯減少,差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.TNF-a在三組心肌中的表達(dá)
　　TNF-a在早期心肌缺血猝死組及晚期心肌梗死猝死組中呈高表達(dá),陽性表達(dá)率分別為6

7、3.3％、83.3％,且晚期心肌梗死猝死組比早期心肌缺血猝死組表達(dá)更多,而正常心肌組中表達(dá)陽性率僅15.0％,與兩個(gè)猝死組比較存在顯著差異(P＜0.05)。
　　4.Cx45、Cx40、TNF-a三者mRNA在三組心肌中的表達(dá)
　　qRT-PCR結(jié)果顯示:Cx45蛋白、Cx40蛋白及TNF-a三者的mRNA表達(dá)與各自蛋白本身表達(dá)相一致,在正常心肌組、早期心肌缺血猝死組和晚期心肌梗死猝死組中表達(dá)存在顯著差異,差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、(P＜0.01)。
　　5.Cx45、Cx40、TNF-a在三組心肌中相關(guān)性分析
　　經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn):在早期心肌缺血猝死組和晚期心肌梗死猝死組中,Cx45和TNF-a及兩者mRNA表達(dá)增加,呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)R=3.133,P＜0.01。Cx45和Cx40及兩者mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)R=-1.453,P＜0.01。
　　結(jié)論：
　　1、Cx45及其mRNA在早期心肌缺血猝死組及晚期心肌梗死猝死組心肌細(xì)胞

9、胞漿中表達(dá)水平高于正常心肌組,這將有可能作為心源性猝死診斷的輔助指標(biāo)。
　　2、Cx40及其mRNA在兩個(gè)猝死組心肌組織中表達(dá)低于正常心肌組,也可以作為法醫(yī)學(xué)診斷心源性猝死的指標(biāo)之一。
　　3、TNF-a及其mRNA在早期心肌缺血猝死組和晚期心肌梗死猝死組的表達(dá)顯著高于正常心肌組,且晚期心肌梗死猝死組比早期心肌缺血猝死組表達(dá)更多,三組中的表達(dá)差異,有可能有利于心源性猝死的診斷,且有可能根據(jù)猝死者心肌組織中TNF-a的表達(dá)量的