脂代謝重編程在宮頸癌放療抵抗中的作用及分子機制研究.pdf

1、宮頸癌(cervical cancer)是嚴重威脅婦女健康的常見惡性腫瘤之一，占全球女性的第三位。近年來發(fā)病率不斷上升，大約每年有460，000新發(fā)病例，其中約274，000萬患者死亡，且發(fā)病逐漸年輕化。放射治療在宮頸癌的治療中具有極其重要作用和地位，尤其對于已失去手術機會的中晚期及復發(fā)宮頸癌，放射治療是其主要的治療手段。近年來，雖然隨著放療技術的發(fā)展及放療設備的優(yōu)化，其臨床治療效果有了一定程度的提高，但總體療效仍不樂觀，放療抵抗是治療

2、失敗的主要原因。因此，探討宮頸癌放療抵抗的機制，提高其放療敏感性對于其治療具有十分重要臨床意義。
　　代謝重編程在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。既往對于代謝重編程在腫瘤生物學特性中的研究表明其可誘導腫瘤細胞凋亡耐受、促進腫瘤侵襲轉移以及化療耐受.但代謝重編程是否參與宮頸癌放療抵抗尚不明確。
　　線粒體是細胞的能量供應的主要場所，維持線粒體功能正常對確保細胞在應激狀態(tài)下能量供應充足而對抗凋亡具有重要意義。線粒體氧化磷酸化過程中

3、釋放ROS導致線粒體損傷，受損線粒體釋放細胞色素C及Caspase等誘導細胞凋亡。因此有效清除受損線粒體是維持線粒體功能正常的重要保障。既往研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，放療可誘導腦膠質瘤細胞自噬發(fā)生，自噬抑制劑（3-MA）能顯著增強乳腺癌MCF-7細胞對放射線的敏感性表明自噬在細胞對放射線的反應中起保護作用。放射線誘導細胞自噬，增加HeLa及H1299細胞放療敏感性。但線粒體自噬在宮頸癌的放療抵抗中的作用及其機制尚不明確。因此本課題擬在前期宮頸癌放療

4、抵抗細胞株的建立基礎上，探究宮頸癌放療抵抗的能量代謝基礎及線粒體自噬在在宮頸癌的放療抵抗中的作用及機制。
　　目的:
　　1.明確宮頸癌放療抵抗細胞株的能量代謝特點;
　　2.證實線粒體自噬在宮頸癌放療抵抗中的作用;
　　3.探討代謝重編程調控線粒體自噬介導宮頸癌放療抵抗的分子機制。
　　方法:
　　1.采用基因芯片分析放宮頸癌Hela及Hela-R細胞的基因表達譜;采用Western-blot等方法

5、，檢測Hela及Hela-R細胞中代謝酶的表達特點及其相關性。
　　2.采用代謝組學及脂質組學分析Hela及Hela-R細胞的代謝特點，seahorse檢測兩組細胞線粒體功能(OCAR)及糖酵解能力(ECAR)。采用激光共聚焦和透射電鏡，觀察射治療條件下宮頸癌細胞的線粒體膜電位(Δψ)及線粒體自噬情況;
　　4.慢病毒載體建立CRLS1敲低及過表達的細胞模型用于研究CRLS1對宮頸癌放療抵抗的作用及機制。
　　結果:<

6、br>　　1.基因芯片、Western-blot及代謝組學結果表明，Hela與Hela-R細胞相比，糖酵解無明顯差異，而線粒體內脂質氧化明顯增強
　　2.Mitotracker及seahorse結果表明，Hela-R細胞的線粒體功能明顯高于其親本Hela細胞。
　　3.電鏡及激光共聚焦結果表明，放療抵抗細胞株在接受放射線照射后線粒體自噬明顯高于親本
　　4.CRLS1表達上調增加線粒體心磷脂從而增強線粒體自噬。