ppGalNac-T10在肺腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究目的：
　　多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶10(pp GalNac-T10)是多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶家族成員之一。根據(jù)已有研究推測(cè)pp GalNac-T10的異常表達(dá)可能與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移和惡性生長(zhǎng)密切相關(guān)，在肺腺癌的組織芯片中發(fā)現(xiàn)pp GalNac-T10在癌組織的陽(yáng)性率比癌旁組織中低，但是其細(xì)胞生物學(xué)功能及其分子作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。
　　研究方法：
　　1、為了選擇合適的細(xì)胞系進(jìn)行本研究，首先通過qPCR和

2、Western blot實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同肺腺癌細(xì)胞系的GalNac-T10的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)量，以匹配相應(yīng)的過表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒。2、A549和H322細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染對(duì)應(yīng)干擾GalNac-T10質(zhì)粒和過表達(dá)GalNac-T10質(zhì)粒后，通過CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的OD值變化，以檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力。3、通過流式細(xì)胞儀，檢測(cè)不同處理組細(xì)胞的周期分布變化，細(xì)胞凋亡變化。研究GalNac-T10高表達(dá)或低表達(dá)后對(duì)A549和H322細(xì)胞的增

3、殖凋亡的影響。4、細(xì)胞轉(zhuǎn)染后通過Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲的細(xì)胞數(shù)，反映細(xì)胞的侵襲能力。研究pp GalNac-T10高表達(dá)或低表達(dá)后對(duì)對(duì)A549和H322細(xì)胞侵襲的影響。5、對(duì)已改變pp GalNac-T10的肺腺癌細(xì)胞系用基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)，檢測(cè)因pp GalNac-T10表達(dá)改變而改變的顯著差異基因。6、對(duì)找出的差異基因進(jìn)行生物信息學(xué)的數(shù)據(jù)分析，找出pp GalNac-T10影響肺腺癌的潛在下游基因，為進(jìn)一步研究p

4、p GalNac-T10調(diào)控肺腺癌的分子機(jī)制打好基礎(chǔ)。
　　研究結(jié)果：
　　不同處理組的CCK8實(shí)驗(yàn)表明，上調(diào)pp GalNac-T10在細(xì)胞中的表達(dá)會(huì)顯著抑制肺腺癌細(xì)胞的增殖，相反下調(diào)pp GalNac-T10也會(huì)一定程度上促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖。2.流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示上調(diào)pp GalNac-T10會(huì)使細(xì)胞停滯在G1期，抑制細(xì)胞增殖，下調(diào)pp GalNac-T10的結(jié)果正好相反，會(huì)促進(jìn)細(xì)胞增殖，細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明上調(diào)pp

5、 GalNac-T10會(huì)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。3.在Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)中，下調(diào)pp GalNac-T10表達(dá)的A549細(xì)胞中穿過基質(zhì)膠的細(xì)胞變多，說明細(xì)胞侵襲能力變強(qiáng)，上調(diào)pp GalNac-T10的H322細(xì)胞的侵襲能力一定程度上變?nèi)酢＿@些結(jié)果表明pp GalNac-T10可能在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過程中起到抑制作用，與預(yù)實(shí)驗(yàn)中組織芯片的結(jié)果一致。4.對(duì)相應(yīng)的H322細(xì)胞和A549細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)譜芯片分析，結(jié)果表明，上調(diào)pp GalNac-T

6、10處理組有932個(gè)顯著表達(dá)差異基因，下調(diào)pp GalNac-T10處理組有1073個(gè)顯著表達(dá)差異基因。pp GalNac-T10在TGF-beta通路中的潛在下游基因有AMH，BMP2，ID1，ID3，SMAD1，SMAD9，ACVR1，DCN，F(xiàn)ST，MAPK3，RHOA，在EGFR相關(guān)通路中的潛在下游基因有AXL，BAX,EGFR,EIF4E,ERBB3,FGF2,GAS6,IL6,MAPK3,NRAS,NRG1,PTEN,BCL

7、2L11,FGFR3,NF1,PDGFA,PDGFB,PIK3CB,VEGFA。5.在進(jìn)一步探索性數(shù)據(jù)分析后，發(fā)現(xiàn)芯片數(shù)據(jù)中顯著差異基因的生物進(jìn)程和通路富集主要涉及到p53信號(hào)通路和Fox0信號(hào)通路。
　　研究結(jié)論：
　　在細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)中，上調(diào)pp GalNAc-T10會(huì)抑制肺腺癌細(xì)胞系的增殖和侵襲，也會(huì)促進(jìn)凋亡，將細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期;pp GalNAc-T10在肺腺癌中屬于抑癌基因。pp GalNAc-T10在TG