EphA3基因穩(wěn)定表達細胞模型的建立.pdf

1、EphA3是一個新發(fā)現(xiàn)的基因，目前關于它的文獻報道得較少。我們實驗室在研究前列腺癌相關基因PC-1的時候發(fā)現(xiàn)EphA3的表達與PC-1基因的表達有相關性，這種相關性提示我們，EphA3可能在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。 因此，為了驗證我們的推測，按照常規(guī)的研究思路，構建了pcDNA3.1(-)/myc-his-EphA3的真核表達載體，通過穩(wěn)定轉染將其導入成纖維細胞NIH3T3中建立穩(wěn)定的NIH3T3-EphA3、NIH3T

2、3-null的細胞克隆，然后通過MTT、平板克隆實驗、軟瓊脂集落形成實驗初步證明EphA3的高表達可以顯著提高前列腺癌的克隆形成能力和錨著非依賴生長能力，即可促進前列腺癌的惡性轉化。 而且，為了證明EphA3基因是否能象PC-1一樣極顯著的促進前列腺癌細胞的惡性轉化，即證明EphA3基因是否為真正的前列腺癌正相關基因，構建了真核表達載體pcDNA3.1-EphA3-IRES-PC-1，并通過穩(wěn)定轉染前列腺癌細胞獲得了高表達Eph

3、A3、PC-1的LNCaP-EphA3、LNCaP-PC-1的穩(wěn)定細胞克隆，以及同時穩(wěn)定表達EphA3和PC-1的LNCaP-EphA3-PC-1細胞克隆。 穩(wěn)定的細胞克隆通過平板克隆實驗、軟瓊脂集落形成實驗、裸鼠成瘤實驗，初步證明EphA3、PC-1的高表達均可以顯著提高前列腺癌的克隆形成能力和錨著非依賴生長能力，以及導致裸鼠體內成瘤。即EphA3具有與PC-1相似的功能。 另外，構建了九個用于進行蛋白質相互作用實驗的