艾灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的系統(tǒng)性評(píng)價(jià)及其治療機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　(1)采用系統(tǒng)性評(píng)價(jià)方法，納入艾灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，對(duì)艾灸干預(yù)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的效果進(jìn)行全面的評(píng)價(jià)。
　　(2)借助血清蛋白組學(xué)技術(shù)，從整體角度探究艾灸干預(yù)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的作用機(jī)制。
　　材料和方法:
　　(1)系統(tǒng)性評(píng)價(jià)研究:所檢索的數(shù)據(jù)庫包括了Medline，Embase，CINAHL，the CochraneCentral Register of Controlled Tri

2、als，中國生物醫(yī)學(xué)庫，中國知網(wǎng)和萬方數(shù)據(jù)庫。檢索時(shí)間從數(shù)據(jù)庫成立最開始的時(shí)間到2014年的11月份。符合納入條件的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)中，艾灸可以為單獨(dú)使用，或者與西藥聯(lián)合使用治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。整個(gè)系統(tǒng)性評(píng)價(jià)中，隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)研究的選取，數(shù)據(jù)提取等過程都是由兩位獨(dú)立的研究者進(jìn)行的。Cochrane risk of bias工具將被應(yīng)用于隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)的方法學(xué)評(píng)價(jià)。
　　(2)治療機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)研究:以36只雄性SD大鼠為研究對(duì)象，進(jìn)行

3、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎造模，造模后隨機(jī)分為6組，艾灸Ⅰ組，艾灸Ⅱ組，艾灸Ⅲ組，模型Ⅰ組，模型Ⅱ組，模型Ⅲ組，每組各6只。模型組不予治療，艾灸組在足三里和腎俞穴位上給予艾灸治療。Ⅰ組觀察或干預(yù)1周，Ⅱ組觀察或干預(yù)2周，Ⅲ組觀察或干預(yù)3周。比較艾灸Ⅲ組、模型Ⅲ組干預(yù)前，干預(yù)1周、2周、3周的關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Arthritis score，AI)。分別采集各組觀察或者干預(yù)結(jié)束后的血清標(biāo)本。運(yùn)用二維凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜分析技術(shù)，探究和艾灸干預(yù)相關(guān)的蛋白。利用生物

4、信息學(xué)技術(shù)，對(duì)鑒定的相關(guān)蛋白進(jìn)一步的整合和分析。
　　結(jié)果:
　　(1)系統(tǒng)性評(píng)價(jià)研究:
　　①總有效率(response rate):Meta分析結(jié)果提示，和西藥治療相比，艾灸可以有效提高response rate[RR=1.18,95％CI(1.03,1.35), p=0.02; heterogeneity: Chi2=1.11,p=0.77，I2=0％]。此外，與單獨(dú)的西藥治療相比，艾灸和西藥的聯(lián)用可以提高res

5、ponse rate[RR=1.28,95％CI(1.12,1.47),p=0.0004; heterogeneity: Chi2=1.96,p=0.58，I2=0％]。
　　②美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)定義的改善率(Amercan College Rheumatology, ACR):與單獨(dú)的西藥治療相比，艾灸和西藥的聯(lián)用可以改善ACR50[RR=1.57，95％CI(1.25，1.99)，p=0.0001;heterogeneity:Ch

6、i2=2.87，p=0.58，I2=0％]，然而同樣的效果并沒有在ACR20上發(fā)現(xiàn)。
　?、奂膊』顒?dòng)度評(píng)分(Disease Activity Score28，DAS28): Meta分析結(jié)果顯示，和單純西藥治療相比，西藥加艾灸的治療在降低DAS28方面沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[MD=-0.45，95％CI(-0.89，-0.01)，p=0.05]，但是具有降低DAS28指數(shù)的趨勢。
　　(2)治療機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)研究:

7、>　?、倌Ｐ廷蠼M和艾灸Ⅲ組的大鼠在艾灸干預(yù)前AI指數(shù)并沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。經(jīng)過3周的艾灸干預(yù)后，與模型Ⅲ組相比，艾灸Ⅲ組的AI指數(shù)顯著降低且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01）。
　?、诎蘑窠M和模型Ⅰ組之間共鑒定出339個(gè)差異蛋白點(diǎn);艾灸Ⅱ組和模型Ⅱ組之間共鑒定出358個(gè)差異蛋白點(diǎn);艾灸Ⅲ組和模型Ⅲ組之間共鑒定出347個(gè)差異蛋白點(diǎn)。三個(gè)時(shí)間點(diǎn)共同表達(dá)的差異蛋白點(diǎn)有17個(gè)。在這17個(gè)共同表達(dá)的差異蛋白中，表達(dá)量上調(diào)的蛋

8、白有16個(gè)，表達(dá)量下調(diào)的蛋白有1個(gè)。
　?、?7個(gè)和艾灸干預(yù)相關(guān)的蛋白采用GO分析。一共鑒定出了4個(gè)細(xì)胞位置，7個(gè)分子功能和3個(gè)生物學(xué)過程。在細(xì)胞位置中排前三位的分別是細(xì)胞質(zhì)(62％)，細(xì)胞間隙(19％)和其它(13％);在分子功能中排前三位的分別是酶(38％)，其它(25％)和轉(zhuǎn)運(yùn)載體(13％);在生物學(xué)過程中排前三位的分別是代謝過程(56％)，免疫反應(yīng)(31％)，和細(xì)胞反應(yīng)(13％)。
　?、?7個(gè)和艾灸干預(yù)相關(guān)的蛋白采

9、用IPA分析。鑒定出了4個(gè)富集度最高的信號(hào)通路:Huntington's disease signalling,endothelial nitric oxide synthase(eNOS) signalling,aldosteronesignalling in epithelial cells和unfolded protein response。
　?、軵RDX1和IP3R作為兩個(gè)候選蛋白通過ELISA法進(jìn)行反向驗(yàn)證。和模型組相

10、比，艾灸組可以在干預(yù)的第1周，第2周和第3周明顯提高PRDX1和IP3R的蛋白表達(dá)水平(p＜0.05)。因此，通過本次的ELISA法的反向驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，我們可以看出這兩個(gè)候選蛋白表達(dá)量上調(diào)的趨勢和質(zhì)譜分析的結(jié)果一致，具有較強(qiáng)的可靠性。
　　結(jié)論:
　　(1)本次的系統(tǒng)性評(píng)價(jià)提示艾灸治療可能給類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者帶來獲益。然而，考慮到所納入隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)研究的樣本量較小，偏倚度較高，因此本次系統(tǒng)性評(píng)價(jià)的陽性結(jié)果在解釋的時(shí)候仍然需要非常小