CD59特異位點(diǎn)的封閉短肽對(duì)T系白血病細(xì)胞抑制作用機(jī)理的研究.pdf

1、目的：研究 CD59特異活性位點(diǎn)的封閉短肽對(duì)Jurkat細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子（Lat、Stat3、Nf-Kb3、BcL-xL、Caspase-3)作用影響，探討CD59特異位點(diǎn)的封閉短肽SP22對(duì)Jurkat細(xì)胞的具體作用機(jī)制，建立T系Jurkat細(xì)胞的白血病裸鼠模型，研究封閉短肽SP22對(duì)白血病裸鼠Jurkat細(xì)胞跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，為臨床T系白血病的研究治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：一，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞分為①Jurkat細(xì)胞對(duì)照組（

2、Jurkat組）②加SP22配體肽Jurkat細(xì)胞組（SP22組）。分別培養(yǎng)48h后，采用C C K和B R D U方法來(lái)檢測(cè)兩組細(xì)胞增殖率；流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)兩組細(xì)胞的凋亡情況；實(shí)時(shí)定量PCR----從基因水平上測(cè)定兩組細(xì)胞實(shí)驗(yàn)前后接頭蛋白Lat和增殖與凋亡基因Stat3、Nf-Kb3、BcL-xL, Caspas-3的表達(dá)情況，ELISA檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子；Western blot檢測(cè)信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)。二，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)構(gòu)建J u

3、r k a t細(xì)胞白血病裸鼠模型：將24只BALB/c-nu雌性裸鼠隨機(jī)分成3組，每一組平均8只。設(shè)①注射PBS組（空白組）：②注射Jurkat細(xì)胞組（Jurkat組）③注射經(jīng)SP22配體肽封閉的Jurkat細(xì)胞組（SP22組）；三組實(shí)驗(yàn)小鼠共注射4周，每周注射前后分別稱(chēng)量小鼠體重，每周計(jì)數(shù)外周血白細(xì)胞數(shù)量；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠骨髓和外周血中Jurkat細(xì)胞凋亡水平；ELISA檢測(cè)小鼠血清中IL-2和TNF-a水平；小鼠肝臟、脾臟行組織

4、切片染色觀察病理變化；免疫組化檢測(cè)小鼠肝臟、脾臟中BcL-xL和Caspase-3的表達(dá)。
　　結(jié)果：一，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)SP22組細(xì)胞增殖抑制率大于Jurkat組(P＜0.05);SP22組與Jurkat組比較Lat、Stat3、Nf-Kb3、BcL-xL的基因表達(dá)出現(xiàn)下降(P＜0.05)，Caspas-3基因表達(dá)表現(xiàn)為上升(P＜0.05); SP22組加SP22配體肽濃度為40 m g/m l組的細(xì)胞凋亡比例增加顯著，D N A合成期

5、細(xì)胞比例下降明顯，與Jurkat組比較差異有意義(P＜0.05); SP22組與Jurkat組相比，細(xì)胞分泌促腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的白介素2(IL-2)和TGF-P明顯下降(P＜0.05)。二，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)白血病裸鼠模型構(gòu)建成功后，SP22組小鼠個(gè)體質(zhì)量小于空白組，大于Jurkat組。SP22組小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)多于空白組，少于Jurkat組(P＜0.05)。流式細(xì)胞儀凋亡檢測(cè)顯示SP22組小鼠骨髓和外周血Jurkat細(xì)胞凋亡水平高于Jurkat組

6、(P＜0.05)。ELISA檢測(cè)顯示，SP22組小鼠血清中IL-2與TNF-a水平低于Jurkat組(P＜0.05)。組織切片H E染色顯示，空白組小鼠的肝組織未見(jiàn)異常；Jurkat組、SP22組小鼠的肝組織內(nèi)均有Jurkat細(xì)胞的浸潤(rùn)，肝索排列紊亂，偶見(jiàn)假小葉的形成，Jurkat組小鼠肝臟組織中Jurkat細(xì)胞的浸潤(rùn)程度大于加SP22組?？瞻仔∈蟮钠⒔M織未見(jiàn)異常；Jurkat組、SP22組小鼠的脾組織內(nèi)均有Jurkat細(xì)胞的浸潤(rùn)，可見(jiàn)

7、不同程度的結(jié)構(gòu)紊亂；Jurkat組小鼠的脾組織中Jurkat細(xì)胞浸潤(rùn)程度大于加SP22組。免疫組化顯示SP22組小鼠肝臟、脾臟的Caspase-3表達(dá)水平高于Jurkat組，SP22組小鼠肝臟、脾臟的BcL-xL表達(dá)水平低于Jurkat組。
　　結(jié)論：通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)CD59特異位點(diǎn)的封閉短肽SP22具有抑制T系白血病Jurkat細(xì)胞的增殖作用，降低Lat、Stat3、NF-Kb、BcL-xL信號(hào)分子的表達(dá)，促進(jìn)Ca