腫瘤相關(guān)抗原特異性T細(xì)胞治療急性髓系白血病的臨床研究.pdf

1、研究背景:AML（急性髓系白血?。┦窃煅到y(tǒng)的一類(lèi)惡性腫瘤，對(duì)其分子生物學(xué)特征和臨床治療方面，除了急性早幼粒細(xì)胞白血病(M3)有比較深入的了解，能夠針對(duì)靶基因采取誘導(dǎo)分化治療外，其他的髓系白血病仍以聯(lián)合化療為主，其次為自體造血干細(xì)胞移植及異基因造血干細(xì)胞移植。部分患者經(jīng)化療可獲得完全緩解，但多數(shù)腫瘤患者5年CCR（持續(xù)完全緩解）概率較低，治療失敗的主要原因是體內(nèi)殘留白血病復(fù)發(fā)。異基因造血干細(xì)胞移植后腫瘤復(fù)發(fā)率較低，但一般只適合50歲以下

2、的患者，需要HLA（人類(lèi)白細(xì)胞抗原）配型相合的供者，并發(fā)癥較多，費(fèi)用高，能接受異基因造血干細(xì)胞移植治療的患者較少，而且仍有部分患者復(fù)發(fā)。因此，包括急性白血病在內(nèi)的多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤的攻克需要發(fā)展新的治療方法。
　　目的:TAA-CTL（腫瘤相關(guān)抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞）由腫瘤抗原激活并賦予抗腫瘤的特異性。目前已經(jīng)可以采用多種手段在體外制備具有腫瘤相關(guān)抗原特異性的免疫活性CTL,并在臨床試驗(yàn)中展示初步其有效的抗腫瘤作用。盡管如

3、此，由于受不同個(gè)體和不同腫瘤抗原的多樣性、腫瘤抗原遞呈的有效性以及特異性腫瘤抗原鑒定和分離技術(shù)等條件的限制，目前TAA-CTL的制各技術(shù)尚需進(jìn)一步完善，也限制了它的廣泛應(yīng)用。本研究旨在建立TAA-CTL治療技術(shù)體系，并對(duì)靶向多種腫瘤相關(guān)抗原(NY-ESO-1、MAGEA3、PRAME、Survivin和WT-1)的自體TAA-CTL治療AML的安全性和有效性予以初步探討。
　　方法:抽取AML患者外周血100ml，分離外周血單個(gè)核

4、細(xì)胞，培養(yǎng)DC（樹(shù)突細(xì)胞）并附載多種白血病相關(guān)抗原混合多肽(NY-ESO-1、MAGEA3、PRAME、Survivin和WT-1)，將DC與自體外周血單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng)，制各自血病抗原特異性T細(xì)胞，3周后回輸患者?；剌敽笸瑫r(shí)予以皮下注射IL-2100-150萬(wàn)IU/天×14天。9例患者均為中高危AML（非M3）?；剌擳AA-CTL前，骨髓復(fù)發(fā)者2例、MRD+（流式細(xì)胞術(shù)）者3例、MRD-者4例;中位年齡51歲（30-68歲）。留取回輸前

5、的TAA-CTL用于流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞表型特征。在TAA-CTL輸注患者體內(nèi)后分別于第一周，第二周，第三周，第四周抽取患者外周血，提取單個(gè)核細(xì)胞用于ELISpot檢測(cè)，根據(jù)其分泌γ-干擾素水平測(cè)定TAA-CTL的活性。
　　結(jié)果:每個(gè)患者接受1-3次TAA-CTL細(xì)胞回輸，每次1.04-5.08x107個(gè)細(xì)胞/m2。全部9例患者輸注過(guò)程中和輸注后無(wú)明顯的不良反應(yīng)，2例患者使用IL-2后出現(xiàn)發(fā)熱和注射部位腫脹，停用IL-2后癥狀消失

6、。9例患者中用作輔助治療的4例MRD-患者，目前仍為MRD-（10-23個(gè)月，隨訪(fǎng)中，均未接受其它治療）。2例由MRD-轉(zhuǎn)為MRD+的患者，經(jīng)過(guò)1個(gè)療程TAA-CTL細(xì)胞治療后，MRD均轉(zhuǎn)為持續(xù)陰性（9個(gè)月和13個(gè)月，隨訪(fǎng)中，均未接受其它治療）。1例經(jīng)多個(gè)療程化療后MRD仍為陽(yáng)性的患者，回輸TAA-CTL細(xì)胞前給予地西他濱（10mg/m2，d1-5）1個(gè)療程后，MRD轉(zhuǎn)為陰性，但5個(gè)月后患者復(fù)發(fā)，再次行TAA-CTL聯(lián)合地西他濱+CAG

7、方案后疾病仍未緩解，后接受誘導(dǎo)化療，但原發(fā)病始終未緩解，目前予以姑息治療中，病情穩(wěn)定。2例復(fù)發(fā)患者中，1例經(jīng)過(guò)1個(gè)療程TAA-CTL的后疾病穩(wěn)定，2個(gè)月后再次給予回輸TAA-CTL，同時(shí)給予地西他濱聯(lián)合CAG方案化療后達(dá)到CR，此后予以強(qiáng)化鞏固治療，但疾病于6個(gè)月后復(fù)發(fā)，并于8個(gè)月后因感染及出血死亡;另1例經(jīng)過(guò)1個(gè)療程TAA-CTL+地西他濱聯(lián)合CAG方案化療后達(dá)到CR（9個(gè)月，隨訪(fǎng)中，未接受其他治療）。CTL細(xì)胞表型檢測(cè)部分:培養(yǎng)細(xì)胞

8、以CD3+T為主（93.5％，56.5％-99％），少量的NK細(xì)胞(CD3-D56+，4.9％，0.3％-9.8％)和極少量的B細(xì)胞(CD19+，0.3％，0-0.6％)。CD3+T細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞分別占43.2％(5.5％-64％)，和37.4％（3.2％-57.1％）。CD8+T細(xì)胞中，效應(yīng)記憶T細(xì)胞(CD45RO+CD62L-CCR7-)占50.2％（3.9％-78％），中樞記憶T細(xì)胞(CD45RO+CD62L

9、+CCR7+)占13.5％(0.8％-21％)，初始T細(xì)胞(CD45RA+CD62L+CCR7+)占2.1％（0.5％-3.9％）;CD4+T細(xì)胞中，效應(yīng)記憶T細(xì)胞占46.7％(5.6％-63.3％)，中樞記憶T細(xì)胞占5.7％，(0-12.3％)，初始T細(xì)胞占3.9％（0-8.9％）。ELISpot實(shí)驗(yàn)顯示，對(duì)于接受過(guò)1次TAA-CTL治療患者中，動(dòng)態(tài)檢測(cè)患者外周血SFC（斑點(diǎn)形成細(xì)胞）變化，提示隨著時(shí)間推移，SFC曲線(xiàn)逐漸升高，后逐漸

10、回落，平均最高峰發(fā)生在輸注細(xì)胞后2.3周，部分接受2-3次細(xì)胞治療的患者，結(jié)合患者臨床表現(xiàn)，持續(xù)緩解患者外周血檢測(cè)的SFC數(shù)量較多，最多可達(dá)253/2*105個(gè)細(xì)胞，而原發(fā)病數(shù)月內(nèi)復(fù)發(fā)，持續(xù)不緩解患者SFC數(shù)量低，曲線(xiàn)低平。
　　結(jié)論:靶向多種腫瘤相關(guān)抗原（NY-ESO-1、MAGEA3、PRAME、Survivin和WT-1）的自體TAA-CTL治療AML具有很好的安全性，并初步顯示其臨床療效。TAA-CTL制備過(guò)程中可產(chǎn)生一系