血流動力學變化對血管重構(gòu)調(diào)控機制初步實驗研究.pdf

1、研究背景:許多臨床現(xiàn)象顯示，機械應(yīng)激是影響機體修復(fù)的重要因素，減輕機械應(yīng)激可以減輕修復(fù)的程度。在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，瘢痕的形成和機械應(yīng)激密切相關(guān)，無機械應(yīng)激的手術(shù)切口瘢痕增生不明顯，骨折端的輕微機械應(yīng)激導(dǎo)致骨痂大量增生，即過度的修復(fù)，無機械應(yīng)激可以獲得一期愈合，沒有骨痂形成等等，上述事實都說明機械應(yīng)激是影響組織修復(fù)的重要因素。并且很多相關(guān)的基礎(chǔ)研究也證實此理論，此理論能否在血管上得到證實，血流動力學的改變是否能夠?qū)е卵鼙诮Y(jié)構(gòu)的重構(gòu)？本課題

2、組的前期工作中發(fā)現(xiàn):1、噴涂a-氰基丙烯酸酯粘合劑均勻包被血管能夠達到固定血管吻合口的目的。2、噴涂粘合劑血管吻合口的狹窄率較低。眾多文獻報道靜脈血管移植到動脈后，靜脈血管管壁出現(xiàn)了動脈化的改變。除營養(yǎng)改變外，血流動力學改變應(yīng)該是導(dǎo)致管壁發(fā)生變化的主要因素。另外當前相關(guān)研究大多集中于臨床較為常見的靜脈移到動脈后血流動力學變化引起血管狹窄機制的研究，但對于其它血流動力學變化調(diào)控血管重構(gòu)機制研究較少，本研究以動靜脈移植和動靜脈瘺兩種模型為對

3、象，對血流動力學變化調(diào)控血管重構(gòu)機制進行初步實驗研究。
　　目的:為了進一步完善血流動力學變化調(diào)控血管重構(gòu)機制理論，并對骨骼肌肉系統(tǒng)出現(xiàn)的“機械應(yīng)激促進增生，減輕機械應(yīng)激抑制增生”現(xiàn)象，是否也適用于血流動力學變化調(diào)控血管重構(gòu)進行驗證。我們選擇了當前研究較少的兩種模型進行相關(guān)理論初步實驗研究，以動靜脈移植和動靜脈瘺兩種模型為對象，對血流動力學參數(shù)進行測量，對血管重構(gòu)中大體、組織、細胞及分子生物水平進行觀察研究，并對兩要素之間關(guān)系進行

4、分析。
　　方法:
　　(1)實驗動物及血管部位的選擇，比格犬和SD大鼠各5只，分別測量兩側(cè)頸總動脈和頸靜脈以及股動靜脈的外徑和便于操作有效長度，分析比較適合模型建立的實驗動物和血管。
　　(2)動靜脈移植模型建立，血流動力學變化調(diào)控血管重構(gòu)機制研究。實驗動物為比格犬12只，12-15kg。1將犬左側(cè)頸總動脈1cm切斷移植到右側(cè)頸外靜脈，結(jié)扎左側(cè)頸總動脈，右側(cè)頸總動脈為對照。分別于術(shù)后1，2，4周對兩組血管進行大體觀察

5、;HE染色，病理組織學觀測內(nèi)膜增生厚度;EVG染色，組織病理學觀測彈性纖維和膠原纖維含量變化;免疫組化染色觀測增值細胞陽性表達;TUNEL技術(shù)觀測調(diào)亡細胞陽性表達;RT-PCR技術(shù)觀測MMP2，9和eNOS基因表達。
　　(3)動靜脈瘺模型建立，血流動力學變化調(diào)控血管重構(gòu)機制研究。實驗動物為比格犬12只，12-15kg。1將犬左側(cè)頸總動脈和頸外靜脈傳統(tǒng)針線吻合，右側(cè)頸總動脈和頸外靜脈為對照。分別于術(shù)后1，2，4周對兩組血管進行大體

6、觀察;HE染色，病理組織學觀測內(nèi)膜增生厚度;EVG染色，組織病理學觀測彈性纖維和膠原纖維含量變化;免疫組化染色觀測增值細胞陽性表達;TUNEL技術(shù)觀測調(diào)亡細胞表達;RT-PCR技術(shù)觀測MMP2，9和eNOS基因表達。
　　結(jié)果:
　　(1)實驗動物比格犬較SD大鼠頸部血管更有利于手術(shù)操作，比格犬更易測量血流動力學變化情況，比格犬血壓和人更加接近。
　　(2)動脈移植到靜脈后，血流速度和血壓明顯減小;HE染色觀測到內(nèi)膜厚

7、度減小;EVG染色觀測到膠原纖維含量明顯減少，彈性纖維含量變化無統(tǒng)計學意義;免疫組化染色，觀測到PCNA指數(shù)無明顯變化;凋亡染色，觀測到凋亡細胞明顯增加，凋亡指數(shù)增大;電鏡觀察，中膜平滑肌細胞減少;RT-PCR觀測到MMP2，9和eNOS均出現(xiàn)基因表達增加。
　　(3)動靜脈瘺術(shù)后，靜脈和動脈段血流速度增加，靜脈血壓上升，動脈血壓小幅度降低;HE染色，測量動脈段內(nèi)膜厚度增加，靜脈段內(nèi)膜厚度增加明顯;EVG染色觀測到動脈段膠原纖維含

8、量增加，靜脈段膠原纖維含量明顯增加，彈性纖維含量變化無統(tǒng)計學意義;免疫組化染色行觀測計算，動脈段PCNA指數(shù)增大，靜脈段PCNA指數(shù)明顯增大;凋亡染色后觀測到動脈段和靜脈段凋亡細胞無明顯增加，凋亡指數(shù)無明顯增大;電鏡觀察，動脈段內(nèi)膜和中膜平滑肌細胞增多，靜脈段內(nèi)膜和中膜平滑肌細胞明顯增加;RT-PCR觀測到動脈段MMP2，9和eNOS表達減少，靜脈段MMP2，9和eNOS表達明顯減少。
　　結(jié)論:通過建立動靜脈移植模型和動靜脈瘺模

9、型，從血流動力學變化調(diào)控血管重構(gòu)機制角度進行實驗研究，進一步完善相關(guān)理論。血流動力學改變后，機械應(yīng)力信號傳導(dǎo)到血管壁細胞，酶(MMP2，9和eNOS等)及細胞因子的表達出現(xiàn)變化，血管壁細胞增殖凋亡及遷移機制改變，細胞外基質(zhì)（膠原纖維和彈性纖維等）代謝機制改變，表現(xiàn)出血管壁結(jié)構(gòu)的變化。進一步證明血流動力學變化對血管重構(gòu)的調(diào)控作用，并且血流動力學改變程度不同，血管重構(gòu)出現(xiàn)明顯不同變化。同時“機械應(yīng)激促進增生，減輕機械應(yīng)激抑制增生”理論假設(shè)在