孕激素、基質(zhì)金屬蛋白酶10、瘦素受體與妊娠期糖尿病的相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus，GDM)提出，已有半個世紀的歷史。研究發(fā)現(xiàn)胰島素抵抗、脂肪因子、炎性因子、遺傳因素以及自身免疫因素等都與GDM發(fā)病密切相關(guān)。脂肪因子之一的瘦素(Leptin，LEP)，自發(fā)現(xiàn)以來，國內(nèi)外眾多學者研究結(jié)果證實是參與糖脂代謝關(guān)鍵因子。瘦素生物學功能的實現(xiàn)，一是與體內(nèi)瘦素濃度有關(guān)，二是與體內(nèi)瘦素受體含量及分布有關(guān)。
　　脂肪組織是瘦素合成和分泌的

2、主要場所。在對妊娠期代謝性疾病的研究發(fā)現(xiàn)，除脂肪組織外，胎盤組織是另一個可合成和分泌瘦素的重要組織。研究還發(fā)現(xiàn)胎盤組織除了合成瘦素外，還可表達瘦素受體。胎盤瘦素功能異常可導致GDM發(fā)生。瘦素受體分型眾多(a，b，c，d，e，f)，存在形式多樣(長型跨膜瘦素受體、短型跨膜瘦素受體和可溶性瘦素受體），目前瘦素受體的研究主要集中在長型跨膜瘦素受體(b型，long formof leptin receptor,Ob-R)和可溶性瘦素受體(e型，

3、soluble form of leptin receptor,SLR)上。長型跨膜瘦素受體主要集中于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，胎盤組織也可表達Ob-R。SLR主要存在血清中，參與調(diào)控血清瘦素濃度。國外學者研究證實SLR在2型糖尿病人群的表達量低于正常人群。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)SLR在GDM組表達低于正常妊娠組。
　　胎盤組織可分泌多種激素參與糖代謝的調(diào)節(jié)，研究證實妊娠期糖耐量異常的孕婦血孕激素水平顯著高于正常妊娠的孕婦，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)

4、糖耐量異常的孕婦血瘦素水平與孕酮呈正相關(guān)，孕激素為GDM發(fā)病的高危因子。國內(nèi)外學者分別證實孕激素可影響瘦素的生物學功能，有學者提出基質(zhì)金屬蛋白酶10(A Disintegrin AndMetalloprotease domain10，ADAM10)可通過裂解長型跨膜瘦素受體(Ob-R)產(chǎn)生可溶性瘦素受體(SLR)。又有學者研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶的激活在一定程度上受到孕激素的影響。因此，我們推測孕激素可影響ADAM10，而ADAM10可通

5、過裂解Ob-R，影響SLR的合成，干擾瘦素功能發(fā)揮，導致孕期糖代謝異常，參與GDM發(fā)病。
　　目的:
　　一、了解ADAM10在胎盤組織的表達情況;二、檢測不同濃度孕激素對早孕人絨毛滋養(yǎng)層細胞表達ADMA10、Ob-R、SLR和LEP的影響，探索孕激素、ADMA10、SLR在GDM發(fā)病中的作用機制。
　　方法:
　　1、收集15例足月單胎GDM孕婦胎盤組織作為研究組，15例足月單胎正常妊娠孕婦胎盤組織作為對照組。

6、所有納入研究對象均參照國際糖尿病協(xié)會和妊娠研究組(International association of diabetes and pregnancy study groups，IADPSG)診斷標準，于妊娠24-28周行75g口服葡萄糖耐量實驗(Oral Glucose Tolerance Test，OGTT)，滿足該診斷標準的為GDM組，不滿足為正常妊娠組。分別采用Western Blotting法、qRT-PCR法檢測ADAM1

7、0蛋白及其mRNA在2組胎盤組織相對表達量，比較2組胎盤ADAM10的表達是否存在差異性。
　　2、收集我院婦產(chǎn)科門診，正常妊娠6-10周，經(jīng)超聲證實為宮內(nèi)妊娠，自愿選擇人工流產(chǎn)終止妊娠且健康女性的早孕胚胎人絨毛組織，進行早孕人絨毛滋養(yǎng)層細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定。根據(jù)本實驗課題組關(guān)于孕激素與妊娠期糖代謝的相關(guān)性研究，分組給予不同濃度孕激素(0ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml)培養(yǎng)早孕人絨毛滋養(yǎng)層細胞，

8、收集細胞及上清液，行Westem Blotting實驗檢測人絨毛滋養(yǎng)層細胞ADAM10和Ob-R蛋白的表達，行酶免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測上清液中SLR、LEP的含量。比較不同濃度孕激素對早孕人絨毛滋養(yǎng)層細胞ADAM10、Ob-R表達的影響及分泌SLR、LEP含量的影響，進一步推測ADAM10與GDM發(fā)病是否存在相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　第一部分:West

9、ern Blotting檢測證實ADAM10蛋白在GDM組的含量顯著低于正常妊娠組(0.98±0.26 VS1.59±0.51，P＜0.01)，qRT-PCR實驗結(jié)果顯示ADAM10mRNA在GDM組的表達低于正常妊娠組(0.37±0.25 VS1.00±0.00，P＜0.01)。
　　第二部分:(1)在0ng/ml、100ng/ml、150ng/ml和200ng/ml孕激素濃度下人絨毛滋養(yǎng)層細胞ADAM10相對表達量分別為1.9

10、411±0.4301、1.3700±0.3041、0.7743±0.1844、0.2433±0.6122，組間兩兩比較P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。(2)各組細胞表達Ob-R相對表達量分別為0.5796±0.3197、0.7070±0.3155、1.2446±0.6636和1.5168±0.8224，組間比較，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(3)各組上清液中SLR濃度分別為:9.4990±0.8068、7.3213±0.1496、5.87

11、20±0.0180和3.8758±1.0690為(ng/ml)，組間兩兩比較P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。(4)各組上清液中LEP濃度為144.87±10.975、287.09±28.762、332.42±14.867、443.09±12.389(ng/ml)，組間兩兩比較P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　1.胎盤組織表達ADAM10，且GDM組胎盤組織ADAM10蛋白及其mRNA的含量低于正常妊娠組，ADAM10