NF-κB信號通路對腦外傷引起的神經(jīng)細胞質(zhì)膜完整性破壞及神經(jīng)功能損害的影響.pdf

1、目的：研究NF—кB信號通路對TBI后神經(jīng)細胞質(zhì)膜完整性破壞及神經(jīng)功能損害的影響，并對其調(diào)節(jié)機制進行初步探討。 方法：采用改良的自由落體損傷裝置建立小鼠定量腦外傷（traumatic brain injury，TBI）模型，實驗組腦室注射SN50（NF—кB的特異性抑制劑）或等體積等滲鹽水，并按傷后時間不同分為傷后1h，6h，12h，24h，48h組，各組分別于處死前1h用腹腔注射法將碘化丙啶（propidium iodide，

2、PI）注入各組小鼠體內(nèi)，采用體視學(xué)顯微鏡計數(shù)各組損傷及其周邊區(qū)（皮質(zhì)與海馬）陽性細胞數(shù)，研究NF—кB信號通路對TBI引起的神經(jīng)細胞質(zhì)膜完整性破壞的影響；用組織缺損體積（lesion volume，LV）評估TBI后腦組織損害的情況，研究NF—кB信號通路對TBI后腦組織損害的影響；采用行為學(xué)試驗（Motor Test和Morris水迷宮試驗）評估TBI后各組動物的運動和學(xué)習(xí)記憶的情況，研究NF—кB．信信號通路對TBI后神經(jīng)功能損害的

3、影響。運用Western blot法和免疫組織化學(xué)法觀察TBI后各實驗組腦組織中凋亡相關(guān)蛋白caspase-3，TNF—α，tBid，自噬/溶酶體途徑相關(guān)蛋白Cathepsin B，炎癥相關(guān)因子TNF—α，caspase-1和神經(jīng)再生標(biāo)志Nestin的表達情況。期望為闡明NF—кB信號通路對TBI后神經(jīng)細胞質(zhì)膜完整性破壞及神經(jīng)功能損害的調(diào)節(jié)機制提供理論依據(jù)。 結(jié)果：PI計數(shù)，形態(tài)學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)和行為學(xué)檢測結(jié)果顯示，與相對應(yīng)各時段等

4、滲鹽水組比較，用SN50阻滯NF—кB信號通路后，損傷區(qū)PI陽性細胞數(shù)減少，缺損體積減小，運動和學(xué)習(xí)記憶功能有所改善；調(diào)亡相關(guān)蛋白（TNF—α、caspase-3、tBid）、自噬/溶酶體途徑相關(guān)蛋白（Cathepsin B）及炎癥反應(yīng)相關(guān)蛋白（TNF—α、caspase-1）的表達量降低，免疫組織化學(xué)染色陽性細胞數(shù)減少，且以24h～48h最為顯著（P<0．05）；神經(jīng)再生相關(guān)蛋白（Nestin）的表達量顯著增加（P<0．05）。

5、 結(jié)論： 1．TBI可以造成神經(jīng)細胞質(zhì)膜完整性破壞，TBI后24h～48h細胞質(zhì)膜完整性破壞數(shù)量達高峰，表現(xiàn)為PI陽性細胞顯著增多；阻滯NF—кB信號通路可以減輕TBI造成的神經(jīng)細胞質(zhì)膜完整性破壞。 2．阻滯NF—кB信號通路可以減小TBI后腦組織的缺損體積。 3．TBI可引起運動和學(xué)習(xí)記憶功能損害，阻滯NF—кB信號通路可以明顯改善TBI后運動和學(xué)習(xí)記憶功能。 4．TBI后TNF—α上調(diào)，凋亡執(zhí)行因子

6、caspase-3被激活；通過對細胞凋亡信號通路的調(diào)節(jié)可能是NF—кB信號通路調(diào)控TBI引起的神經(jīng)細胞質(zhì)膜完整性及季神經(jīng)功能損害的機制之一。 5．TBI后CathepsinB、tBid的表達逐漸增加；NF—кB信號通路可能對TBI后自噬/溶酶體途徑進行調(diào)節(jié)，對自噬/溶酶體途徑的調(diào)節(jié)可能是NF—кB信號通路調(diào)控TBI誘導(dǎo)的繼發(fā)性腦損傷引起的神經(jīng)細胞質(zhì)膜完整性及神經(jīng)功能損害的又一機制。 6．TBI后上調(diào)受損區(qū)域TNF—α和C