NF-κB信號通路對腦外傷引起的神經細胞質膜完整性破壞及神經功能損害的影響.pdf

1、目的：研究NF—кB信號通路對TBI后神經細胞質膜完整性破壞及神經功能損害的影響，并對其調節(jié)機制進行初步探討。 方法：采用改良的自由落體損傷裝置建立小鼠定量腦外傷（traumatic brain injury，TBI）模型，實驗組腦室注射SN50（NF—кB的特異性抑制劑）或等體積等滲鹽水，并按傷后時間不同分為傷后1h，6h，12h，24h，48h組，各組分別于處死前1h用腹腔注射法將碘化丙啶（propidium iodide，

2、PI）注入各組小鼠體內，采用體視學顯微鏡計數各組損傷及其周邊區(qū)（皮質與海馬）陽性細胞數，研究NF—кB信號通路對TBI引起的神經細胞質膜完整性破壞的影響；用組織缺損體積（lesion volume，LV）評估TBI后腦組織損害的情況，研究NF—кB信號通路對TBI后腦組織損害的影響；采用行為學試驗（Motor Test和Morris水迷宮試驗）評估TBI后各組動物的運動和學習記憶的情況，研究NF—кB．信信號通路對TBI后神經功能損害的

3、影響。運用Western blot法和免疫組織化學法觀察TBI后各實驗組腦組織中凋亡相關蛋白caspase-3，TNF—α，tBid，自噬/溶酶體途徑相關蛋白Cathepsin B，炎癥相關因子TNF—α，caspase-1和神經再生標志Nestin的表達情況。期望為闡明NF—кB信號通路對TBI后神經細胞質膜完整性破壞及神經功能損害的調節(jié)機制提供理論依據。 結果：PI計數，形態(tài)學、蛋白質學和行為學檢測結果顯示，與相對應各時段等

4、滲鹽水組比較，用SN50阻滯NF—кB信號通路后，損傷區(qū)PI陽性細胞數減少，缺損體積減小，運動和學習記憶功能有所改善；調亡相關蛋白（TNF—α、caspase-3、tBid）、自噬/溶酶體途徑相關蛋白（Cathepsin B）及炎癥反應相關蛋白（TNF—α、caspase-1）的表達量降低，免疫組織化學染色陽性細胞數減少，且以24h～48h最為顯著（P<0．05）；神經再生相關蛋白（Nestin）的表達量顯著增加（P<0．05）。

5、 結論： 1．TBI可以造成神經細胞質膜完整性破壞，TBI后24h～48h細胞質膜完整性破壞數量達高峰，表現為PI陽性細胞顯著增多；阻滯NF—кB信號通路可以減輕TBI造成的神經細胞質膜完整性破壞。 2．阻滯NF—кB信號通路可以減小TBI后腦組織的缺損體積。 3．TBI可引起運動和學習記憶功能損害，阻滯NF—кB信號通路可以明顯改善TBI后運動和學習記憶功能。 4．TBI后TNF—α上調，凋亡執(zhí)行因子

6、caspase-3被激活；通過對細胞凋亡信號通路的調節(jié)可能是NF—кB信號通路調控TBI引起的神經細胞質膜完整性及季神經功能損害的機制之一。 5．TBI后CathepsinB、tBid的表達逐漸增加；NF—кB信號通路可能對TBI后自噬/溶酶體途徑進行調節(jié)，對自噬/溶酶體途徑的調節(jié)可能是NF—кB信號通路調控TBI誘導的繼發(fā)性腦損傷引起的神經細胞質膜完整性及神經功能損害的又一機制。 6．TBI后上調受損區(qū)域TNF—α和C