2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的: 構(gòu)建針對(duì)Notch-1基因的RNAi慢病毒表達(dá)載體,從轉(zhuǎn)錄后水平抑制Notch-1基因表達(dá),為研究Notch-1信號(hào)通路提供技術(shù)工具;并利用構(gòu)建的RNAi慢病毒感染神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y,篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,觀察抑制Notch-1信號(hào)通路對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y增殖的影響。 方法: 設(shè)計(jì)合成兩對(duì)針對(duì)Notch-1 mRNA不同位點(diǎn)的shRNA編碼序列,克隆到慢病毒穿梭質(zhì)粒中,然后通過Ga

2、teway重組構(gòu)建重組RNAi慢病毒表達(dá)載體;在293FT細(xì)胞中包裝并進(jìn)行病毒滴度測(cè)定,獲得高滴度的病毒上清;慢病毒感染神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y,RT-PCR和Western Blot檢測(cè)構(gòu)建的RNAi慢病毒對(duì)Notch-1表達(dá)的抑制效果;利用RNAi慢病毒抑制Notch-1表達(dá),探討Notch-1信號(hào)通路對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y增殖的影響。 結(jié)果: 1、成功構(gòu)建了針對(duì)Notch-1基因兩個(gè)不同位點(diǎn)的RNA

3、i慢病毒表達(dá)載體,經(jīng)PCR和測(cè)序鑒定干擾片段的堿基序列及插入位點(diǎn)完全正確; 2、在293FT細(xì)胞中包裝,獲得高滴度慢病毒上清;病毒液滴度在1.5×105TU-2.3×105TU之間,可滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要; 3、構(gòu)建的兩個(gè)RNAi慢病毒感染SH-SY5Y細(xì)胞后可使Notch-1mRNA表達(dá)量分別下降80%和66%; 4、慢病毒感染SH-SY5Y后進(jìn)行MTT檢測(cè),RNAi慢病毒組與無義干擾組和對(duì)照組相比,細(xì)胞增殖率明顯

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