SATB1特異的RNAi慢病毒載體構(gòu)建及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖影響.pdf

1、目的：探討SATB1在人乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況，并構(gòu)建針對(duì)SATB1基因的RNAi慢病毒表達(dá)載體，觀察抑制其基因表達(dá)后對(duì)高侵襲性人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖的影響。 方法：1.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中SATB1mRNA表達(dá)情況；2.采用Western-bloting法，檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231中SATB1的表達(dá)情況；3.構(gòu)建針對(duì)SATB1特異的RNAi慢病毒表達(dá)載體并

2、轉(zhuǎn)染入人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231；4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)構(gòu)建的RNAi慢病毒對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中SATB1表達(dá)的抑制效果，并用MTT法檢測(cè)抑制其表達(dá)后對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果：1.人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中有SATB1mRNA顯著表達(dá)；2.人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中的SATB1表達(dá)水平明顯高于正常乳腺上皮細(xì)胞中的SATB1的表達(dá)水平；3。成功構(gòu)建了針對(duì)SATB1基因的RNAi慢病

3、毒表達(dá)載體，并經(jīng)PCR和測(cè)序鑒定干擾片段的堿基序列及插入位點(diǎn)完全正確；4.構(gòu)建的RNAi慢病毒感染人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞后可使SATB1mRNA表達(dá)量顯著下降；MTT法檢測(cè)，RNAi慢病毒組與無(wú)義干擾組和對(duì)照組相比，細(xì)胞增殖率明顯下降。 結(jié)論：1.構(gòu)建SATB1特異的RNAi慢病毒表達(dá)載體能有效抑制SATB1基因的表達(dá)。2.SATB1表達(dá)被抑制后對(duì)高侵襲性的人乳腺癌細(xì)胞株的增殖有顯著抑制作用。由此可推出SATB1可