Nogo下游結(jié)合分子的鑒定及Nogo與BEX1結(jié)合的功能研究.pdf

1、本研究以Nogo-66為誘餌蛋白，酵母雙雜交篩選人腦cDNA文庫(kù)，獲得了BEX1、Clusterin等候選結(jié)合蛋白。通過(guò)半乳糖苷酶檢測(cè)和免疫共沉淀，證明了：Clusterin能與Nogo-B發(fā)生體外結(jié)合；BEX1 與Nogo-A、Nogo-B均能結(jié)合，且能與p75NTR形成復(fù)合物。 將Nogo-B與BEX1、Clusterin和Necdin質(zhì)粒瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后行流式細(xì)胞檢測(cè)，證明BEX1、clusterin以及Necdin

2、均可降低由Nogo-B引起的細(xì)胞調(diào)亡，且BEX1的抗凋亡效應(yīng)明顯高于clusterin和Necdin。將Nogo-B與BEX1共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，通過(guò)Hoechst核染色方法進(jìn)行凋亡細(xì)胞形態(tài)分析發(fā)現(xiàn)，Nogo-B能夠?qū)EX1由核分布為主轉(zhuǎn)變?yōu)橐园麧{分布為主，同時(shí)發(fā)生轉(zhuǎn)位的絕大部分細(xì)胞Hoechst染色都呈現(xiàn)凋亡表型。 將Nogo-A、Nogo-B、對(duì)照質(zhì)粒分別與等量GFP-BEX1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)和West