不同處理方式對中華絨螯蟹血淋巴Vg的影響.pdf

1、卵黃蛋白是甲殼動物胚胎和幼體生長發(fā)育所需的能量和營養(yǎng)源，因此它的合成、積累、多寡等對于胚胎和幼體來說是至關(guān)重要的。本文分離純化了中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）的卵黃蛋白，建立了間接競爭酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（ELISA）測定中華絨螯蟹卵黃蛋白的方法，并研究了切除眼柄及注射不同物質(zhì)對中華絨螯蟹血淋巴中卵黃蛋白原的影響，為深入闡明中華絨螯蟹卵黃發(fā)生及其調(diào)控機理提供基礎(chǔ)材料。
　　 利用聚丙烯酰胺凝膠電泳，采用不同的染色

2、方法，從成熟中華絨螯蟹卵巢中鑒定出卵黃蛋白，利用常規(guī)層析法（DEAE-Cellulose.52）對其進行了純化。
　　 采用常規(guī)免疫方法，以純化的卵黃蛋白作為抗原免疫家兔，制備了抗中華絨螯蟹卵黃蛋白的特異性多克隆抗血清。利用此抗血清，并結(jié)合免疫學(xué)方法對中華絨螯蟹雌性蛋白進行研究，研究發(fā)現(xiàn)：中華絨螯蟹的卵黃蛋白為雌性特異蛋白；卵黃蛋白與卵黃蛋白原有相似的免疫原性；中華絨螯蟹卵黃蛋白與日本沼蝦的卵黃蛋白間沒有免疫交叉反應(yīng)。
　

3、　 利用卵黃蛋白抗血清，建立了間接競爭酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（ELISA）測定中華絨螯蟹卵黃蛋白的方法，并確立了測定參數(shù)：抗血清與包被抗原的最佳工作濃度分別為1：10000和62.5ng/mL；最適檢測范圍為31.25-500ng/mL，批內(nèi)變異系數(shù)為3.38％，批間變異系數(shù)為3.62％。
　　 采用ELISA法，對切除單、雙側(cè)眼柄及向已切除雙側(cè)眼柄河蟹體內(nèi)注射不同物質(zhì)對河蟹血淋巴中卵黃蛋白原濃度的變化進行了跟蹤測定。結(jié)果表明，向已