miRNA-101在膀胱癌中對EZH2基因表達(dá)的調(diào)控作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究miRNA-101（miR-101）通過對EZH2基因的靶向調(diào)控作用，介導(dǎo)膀胱癌的發(fā)生發(fā)展。
　　方法：⑴運(yùn)用Real-time PCR檢測miR-101在膀胱癌及相應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)量；⑵采用組織芯片，通過免疫組織化學(xué)法檢測EZH2基因在膀胱癌組織及相應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)情況；⑶運(yùn)用RT-PCR及Western blot分別檢測EZH2基因在膀胱癌及相應(yīng)的癌旁組織中mRNA及蛋白表達(dá)情況；⑷運(yùn)用miRNA預(yù)測軟件:

2、miRanda、PicTar和Targetscan，預(yù)測與EZH2 mRNA3＇-UTR有互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)的miRNA；⑸運(yùn)用雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)檢測miR-101與EZH2mRNA3＇-UTR是否有互補(bǔ)結(jié)合靶點(diǎn)。
　　結(jié)果：通過Real-time PCR檢測顯示miR-101在膀胱癌組織中轉(zhuǎn)錄水平均低于相應(yīng)的癌旁組織（P＜0.05），提示其可能在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展中起到了抑癌作用；通過免疫組織化學(xué)法、RT-PCR、Western

3、blot法檢測顯示EZH2在膀胱癌組織中表達(dá)量均高于相應(yīng)的癌旁組織（P＜0.05），提示其可能在膀胱癌的進(jìn)展中發(fā)揮了促癌作用；通過miRanda、PicTar和Targetscan三個軟件檢測顯示miR-101與EZH23＇-UTR有互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)；通過雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)檢測進(jìn)一步證明miR-101與EZH23＇-UTR有互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)，并抑制其表達(dá)。
　　結(jié)論：miRNA-101通過負(fù)向調(diào)控EZH2基因的表達(dá)，發(fā)揮抑制膀胱癌的作

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