miR-143在膀胱癌中的表達(dá)及其作用機(jī)理探討.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文miR143在膀胱癌中的表達(dá)及其作用機(jī)理探討姓名：董文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：黃健20080508mjR—143在膀胱癌中的表達(dá)及其作用機(jī)理探討低表達(dá)進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定，并探討膀胱癌中miR一143的低表達(dá)在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中可能存在的作用機(jī)理及臨床意義，為膀胱癌在基因水平的診治提供理論基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。首先，在對(duì)miR一143在膀胱癌中的表達(dá)的鑒定及臨床意義分析方面，我們對(duì)2張miIⅢAs的表達(dá)譜芯片進(jìn)行

2、分析，發(fā)現(xiàn)miR143在正常膀胱上皮組織中高表達(dá)而在膀胱移行上皮癌中卻呈現(xiàn)低表達(dá)的特點(diǎn)，二者的差異表達(dá)高達(dá)177倍。為了對(duì)這一結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步的確認(rèn)，我們運(yùn)用Nonhemblotting技術(shù)檢測(cè)了9例膀胱癌組織、6例正常膀胱組織及膀胱癌細(xì)胞株EJ、T24中miR143的表達(dá)情況結(jié)果顯示6例J下常膀胱組織中miR143高表達(dá)，而9例膀胱癌組織以及EJ、T24細(xì)胞株中miR143不表達(dá)或者低表達(dá)。在這一結(jié)果基礎(chǔ)上，我們?yōu)榱诉M(jìn)一步探討miR14

3、3在膀胱癌中低表達(dá)與臨床病理的關(guān)系，我們運(yùn)用realtimePCR技術(shù)對(duì)28例不同分期分級(jí)的膀胱移行上皮癌組織及2例正常膀胱上皮組織中miR143的表達(dá)進(jìn)行了定量檢測(cè)，結(jié)果顯示所有癌組織中miR143都低表達(dá)，但很遺憾并沒有發(fā)現(xiàn)其與膀胱癌的分期分級(jí)存在顯著的相關(guān)性。其次，在探討膀胱癌中miR143功能學(xué)方面，我們將miR143成熟體、陰性對(duì)照RNA轉(zhuǎn)染膀胱癌EJ細(xì)胞株。轉(zhuǎn)染6h后，熒光顯微鏡下即能觀察到帶綠色熒光的細(xì)胞，轉(zhuǎn)染率90％以上

4、。轉(zhuǎn)染48h后，收集細(xì)胞的總I斟A及蛋白。進(jìn)一步通過RealtimePCR技術(shù)驗(yàn)證了轉(zhuǎn)染的成功，并通過ImPCR，wbstemblot技術(shù)觀察了miR一143的潛在靶基因RAS癌基因編碼蛋白R(shí)AS及ml玳A的變化。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR。143成熟體的膀胱癌EJ細(xì)胞中RAS蛋白的表達(dá)水平明顯降低，HRAS、K—RASmRNA無明顯變化；而對(duì)照組中RAS蛋白、H—RAS及KRASmI礬A均無明顯變化。對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的miR143另一潛在靶基因E

5、RK一5，我們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染miR143成熟體前后膀胱癌EJ細(xì)胞中ERK5蛋白變化不明顯。綜上所述，我們運(yùn)用Nonhemb10ning、realtimePCR技術(shù)證實(shí)了miR143在膀胱癌中較正常膀胱上皮中顯著降低，且miR143可能通過作用于潛在靶基因RAS，抑制其蛋白的翻譯并阻止其傳導(dǎo)通路的活化，從而抑制腫瘤形成。這些研究成果不僅為膀胱癌的發(fā)病機(jī)理提供了新的研究途徑，而且為臨床上膀胱癌的診斷以及miRNAs作為膀胱癌基因治療的新策略奠定了