新型自組裝短肽對皮膚創(chuàng)傷速度修復(fù)過程研究.pdf

1、目的：采用新型自組裝短肽R2I4R2和K2I4K2應(yīng)用于細胞三維培養(yǎng)和皮膚創(chuàng)傷快速修復(fù)，并初步探索其作用機制。
　　方法：剛果紅染色和原子力顯微鏡(AFM)檢測短肽R2I4R2和K2I4K2的宏觀結(jié)構(gòu)；圓二色光譜(CD)檢測理化條件對短肽R2I4R2和K2I4K2二級結(jié)構(gòu)的影響；紅細胞裂解試驗檢測兩條短肽對細胞膜的裂解作用；CCK-8和AO/EB染色檢測短肽R2I4R2和K2I4K2對人皮膚成纖維細胞HFF-1在三維環(huán)境中增殖情況

2、；流式細胞周期分析HFF-1細胞在短肽形成的三維體系中的周期變化；建立SD大鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)模型，考察兩條短肽對皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的影響；HE染色和免疫組化檢測短肽R2I4R2和K2I4K2對皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程的病理變化；Real-time PCR檢測皮膚修復(fù)相關(guān)蛋白基因和通路相關(guān)基因表達量的變化；以Taq DNA聚合酶作蛋白穩(wěn)定假設(shè)模型，通過紫外可見光譜和 real-time PCR考察短肽R2I4R2和K2I4K2對蛋白分子的保護作用。

3、>　　結(jié)果：CD檢測顯示兩條短肽都具有介于α-螺旋和無規(guī)卷曲之間的二級結(jié)構(gòu)，且在不同的離子和溫度條件下都能保持較為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。剛果紅染色和(AFM)結(jié)果表明兩條短肽都能自組裝形成納米纖維支架，進而形成水凝膠。而紅細胞裂解試驗和CCK-8檢測結(jié)果顯示兩條短肽均無細胞毒性，能夠很好的應(yīng)用于細胞三維培養(yǎng)和創(chuàng)傷修復(fù)。動物實驗表明短肽R2I4R2使創(chuàng)傷修復(fù)速度提高約28％，而K2I4K2提高約34%。而HE染色結(jié)果顯示皮膚傷口加入短肽后3-5 d

4、炎癥細胞減少，7 d有血管形成，15 d后肉芽組織纖維化，進入組織重塑期。免疫組化結(jié)果進一步明確在加入短肽R2I4R2和K2I4K2后，5 d時血管內(nèi)皮細胞因子CD34減少，7 d時VEGF含量增多。Real-time PCR結(jié)果顯示HFF-1細胞在短肽形成的三維體系中， PEGRF基因表達量降低， VEGF、Integrin-α3、Integrin-α5和β-tublin基因表達量都有明顯升高。UV檢測結(jié)果顯示，短肽R2I4R2和K2

5、I4K2使對假設(shè)模型分子Taq酶在高溫下的半衰期提高了1.44和1.68倍。Real-time PCR結(jié)果表明短肽R2I4R2和K2I4K2使 Taq酶的擴增效率提高了約1.75和1.86倍。
　　結(jié)論：本研究采用的新型自組裝短肽R2I4R2和K2I4K2二級結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，都能應(yīng)用于細胞的三維培養(yǎng)。且兩條短肽都能刺激創(chuàng)傷處血管再生、促進成纖維細胞遷移而使皮膚創(chuàng)傷快速修復(fù)的作用。本研究將激發(fā)更多的短肽設(shè)計理念的開發(fā)和短肽在組織修復(fù)再生、