豬腎小管發(fā)育及壞死后修復過程的研究.pdf

1、1、目的:
　?、琶鞔_解剖和生理上與人非常接近的中國實驗用小型豬腎臟發(fā)育過程中腎小管的形態(tài)學變化和腎小管各節(jié)段的特異性標志物;
　?、萍毎麡O性是腎小管上皮細胞發(fā)揮生理功能的結構基礎,明確成體豬腎小管壞死后修復過程與胚胎豬腎小管發(fā)育過程中細胞極性形成過程的一致性。
　　2、方法:
　　⑴采用高碘酸-希夫(PAS)染色和免疫熒光染色技術,系統(tǒng)觀察中國實驗用小型豬妊娠28天-112天(E28d-E112d)和出生后1天

2、、7天、14天、21天(P1d-批21d),共17個不同時間點豬腎小管的發(fā)育及腎小管特異性標志物雪蓮花凝集素(LTL)、水通道蛋白1(AQP1)、鈣結合蛋白(Calbindin-D28k)在腎小管不同節(jié)段的表達;
　?、仆ㄟ^肌肉注射硫酸慶大霉素制作出生后12周雄性中國實驗用小型豬急性腎小管壞死后自然修復的動物模型,分別在注射慶大霉素10天后第1天、第7天和第14天取血并采集腎臟標本,另外采集妊娠42天豬的胚胎腎臟標本;采用PAS染

3、色觀察成體豬腎小管壞死后修復再生過程與胚胎豬腎小管發(fā)育過程中腎小管的形態(tài)學變化;以Na+-K+-ATP酶作為細胞極性的標志物,PCNA作為新生細胞的標志物,采用免疫熒光和免疫組織化學染色技術對比觀察成體豬腎小管壞死后修復再生過程與胚胎豬腎小管發(fā)育過程中細胞極性形成的過程。
　　3、結果:
　?、胖袊鴮嶒炗眯⌒拓iE28d可見后腎間充質和輸尿管芽,即后腎已經開始發(fā)育;但這時還沒有腎小管。E35d可見不同節(jié)段的腎小管,即腎小管已開

4、始發(fā)育。從E35d到P14d(E112d-E114d仔豬出生),腎皮質均有生腎區(qū)存在,即不斷有新的腎單位發(fā)生;P21d生腎區(qū)已消失,即不再有新的腎單位產生。
　?、脾貺TL在E28d表達在輸尿管芽,E35d開始在近端小管表達,以刷狀緣表達最為明顯;表達由弱到強,由點狀到線狀。
　?、贏QP1在E28d未見表達,E35d開始表達;AQP1表達在近端小管和髓袢,主要表達在細胞膜,尤其在管腔側的表達更為明顯。
　　③Calb

5、indin-D28k在E28d表達在輸尿管芽,E35d開始表達在遠端小管和集合管;Calbindin-D28k主要表達在細胞質,隨著腎小管發(fā)育,表達逐漸增強。
　　⑶在中國實驗用小型豬腎小管發(fā)育的研究中,發(fā)現(xiàn)集合管來源于輸尿管芽,發(fā)源于輸尿管芽的集合管從被膜下的生腎區(qū)一直延伸到腎髓質。
　?、瘸审w豬注射慶大霉素10天后第1天,腎小管上皮細胞壞死、脫落,腎小管基底膜裸露,管腔內有大量脫落的上皮細胞碎片;第7天,腎小管基底膜出現(xiàn)

6、新再生的腎小管上皮細胞;第14天,大多數(shù)腎小管結構恢復至接近正常。
　?、沙审w豬注射慶大霉素10天后第1天,裸露的腎小管基底膜沒有Na+-K+-ATP酶和PCNA的表達;第7天,新再生的腎小管上皮細胞PCNA陽性,有Na+-K+-ATP酶的表達,但此時Na+-K+-ATP酶沒有明顯的極性分布,胞膜和胞漿均有表達;第14天,PCNA陽性細胞Na+-K+-ATP酶呈極性分布,主要表達在腎小管上皮細胞的側基底膜。
　?、逝咛ヘi腎小

7、管發(fā)育過程是從腎小管前體發(fā)育成為不成熟的腎小管,再發(fā)育成為成熟的腎小管。
　?、伺咛ヘi腎小管發(fā)育過程中,Na+-K+-ATP酶的表達從沒有極性到有極性分布,即Na+-K+-ATP酶從腎小管上皮細胞的胞膜和胞漿均有表達到只局限在側基底膜表達,在這一過程中PCNA均為陽性。
　　4、結論:
　?、胖袊鴮嶒炗眯⌒拓i妊娠28天腎臟開始發(fā)育,妊娠35天可以見到不同節(jié)段腎小管,P14d-P21d生腎區(qū)消失,不再有新的腎單位形成。<