魚類脂味覺的行為學(xué)檢測及候選脂味受體CD36的克隆與表達(dá).pdf

1、味覺是動物對目標(biāo)食物采取接受或拒絕行為而進(jìn)行化學(xué)感受的最后一步,對于動物攝取食物的安全及動物合理的營養(yǎng)需要十分重要。傳統(tǒng)上認(rèn)為,哺乳動物具有5種基本味覺,即:酸、甜、苦、咸和鮮(umami)。研究表明,人們之所以能夠感受酸、甜、苦、咸、鮮味,是因?yàn)樵谖独僦写嬖谥@五種味覺受體(tastereceptor,TR)。近年來對嚙齒動物和人類的研究表明可能還存在第六種味覺,即對脂肪酸等脂肪類食物的味覺感受(脂味覺)。研究顯示,斑馬魚具有苦味和氨

2、基酸味的感受,但魚類是否具有脂味感受呢?到目前為止,這還是一個謎?；诖?本論文擬通過行為學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測魚類是否具有對脂肪酸的味覺感受,如果存在,我們擬進(jìn)一步嘗試對魚類候選脂味受體進(jìn)行鑒定。
　　 由于魚類生活在水中,給有關(guān)魚類味覺行為學(xué)的實(shí)驗(yàn)帶來不小的難度。我們選取斑馬魚和藍(lán)鯊為代表,進(jìn)行了一系列的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)來探索魚類的味覺。對于斑馬魚,我們分別制做了含亞麻酸和亞油酸、氨基酸和苦味劑denatonium benzoat等不同促味劑

3、的餌料,并用熒光染料DiIC12(3)對它們進(jìn)行了熒光標(biāo)記,然后分別飼喂斑馬魚,通過錄像觀察它們對不同食物的吞吐情況,食后迅速解剖腸道在熒光顯微鏡下觀察腸道中食物的熒光強(qiáng)度,分析魚類對不同食物的偏愛性。結(jié)果表明:在斑馬魚攝食的初級階段,觀察到喂養(yǎng)含苦味劑餌料的斑馬魚有明顯的吞食后再吐出現(xiàn)象,而喂養(yǎng)亞麻酸和亞油酸或氨基酸餌料的斑馬魚吞食餌料后都沒有再吐出現(xiàn)象；我們進(jìn)一步觀察斑馬魚腸道中食物的熒光強(qiáng)度,發(fā)現(xiàn)斑馬魚對不同餌料的喜好性為:脂肪酸

4、>氨基酸>苦味劑。綜合之,可以認(rèn)為斑馬魚對含脂肪酸和氨基酸的食物具有偏好性,似乎還更偏好含脂肪酸的餌料,而對含苦味劑denatonium benzoate的餌料有明顯的厭惡感。類似地,對于藍(lán)鯊,我們分別制做了含亞麻酸和亞油酸、糖、氨基酸和苦味劑denatonium benzoat等不同促味劑的餌料,然后分別飼喂藍(lán)鯊,觀察它們對不同食物的吞吐情況,觀察養(yǎng)殖容器中剩余的餌料的多少,計(jì)算吃掉餌料占飼喂餌料的百分比,分析它對不同食物的偏愛性。藍(lán)

5、鯊的味覺行為學(xué)試驗(yàn)表明:藍(lán)鯊對含甜味劑糖精的餌料非常喜歡,有明顯的偏愛,對含脂肪酸和氨基酸的餌料次之,有一定的偏愛,但對含苦味劑denatonium benzoat的餌料不喜歡,甚至厭惡。魚類中的這些行為學(xué)實(shí)驗(yàn)證明:魚類除了具有苦味和氨基酸味的感受外,還具有脂肪酸的味覺感受。另外,我們的實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)藍(lán)鯊對甜味具有偏好性,說明魚類可能具有甜味的味覺感受,這與斑馬魚無甜味覺感受能力的報道不一致。
　　 CD36是一種在大鼠和小鼠舌上皮

6、細(xì)胞的味蕾中均有表達(dá)的脂類黏合蛋白,最近的研究中被確定為感受脂肪酸的受體,尤其是用于識別長鏈脂肪酸。我們通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),斑馬魚中也存在CD36同源基因。通過RT-PCR和實(shí)時熒光定量PCR分別確定了CD36在不同成魚組織和不同胚胎發(fā)育時期中的表達(dá)。研究表明:CD36在不同成魚組織中的中的表達(dá)如下:在腸中的表達(dá)量最高,在肝、鰓、脾中表達(dá)量次之,而在脊椎、腎、腦、鰾中表達(dá)量相對較低。CD36在胚胎發(fā)育早期表達(dá)較高,在囊胚期的表達(dá)量達(dá)