益氣活血中藥對腦出血大鼠腦內(nèi)TSP-1、TSP-2及其受體CD36蛋白表達的影響.pdf

1、目的和背景：腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)占全部腦血管病的35％左右，有很高的發(fā)病率和死亡率，30天內(nèi)的死亡率為50％，40％的存活者遺留嚴(yán)重殘疾，只有10％的病人病后可以獨立生活，是威脅中老年人健康的主要疾病之一。腦出血屬于中醫(yī)“中風(fēng)”范疇，繼往認為其病因病機有風(fēng)、痰、火、氣、血、虛等六端，屬本虛標(biāo)實之證，治療多從風(fēng)痰論治。20世紀(jì)80年代以來，眾多學(xué)者根據(jù)微觀辨證和中醫(yī)理論“離經(jīng)之血便是瘀”的理論

2、，開始將急性腦出血歸于中醫(yī)血證，認為血溢脈外是發(fā)病的原因，血蓄于腦是基本的病機，活血化瘀是治療的關(guān)鍵。其中王清任根據(jù)“氣能行血”理論創(chuàng)制的益氣活血經(jīng)典方補陽還五湯在腦出血治療中效果顯著，已證實其有改善微循環(huán)，改善缺血缺氧，保護腦細胞，促進血腫吸收及腦水腫消退，抑制炎癥反應(yīng)等作用。腦出血損傷區(qū)隨著血腫、水腫的吸收，炎癥的消退，遭到破壞的微血管系統(tǒng)必然通過血管新生而在病灶區(qū)重建，以恢復(fù)損傷區(qū)的血液灌注，為腦組織的修復(fù)奠定基礎(chǔ)。血管新生是由血

3、管新生因子和抑制因子動態(tài)平衡的調(diào)整來完成的。凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondins-1，TSP-1)和凝血酶敏感蛋白-2(thrombospondins-2，TSP-2)的TSR序列與其受體CD36結(jié)合后，能抑制內(nèi)皮細胞的遷移，促進內(nèi)皮細胞凋亡，從而抑制血管新生，是重要的血管新生抑制因子。因此，我們推測益氣活血中藥有可能在腦出血后通過影響TSP-1、TSP-2及其受體CD36蛋白的表達，調(diào)整機體對血管新生的抑制作用，改變血管

4、重建進程，促進腦組織的修復(fù)，而發(fā)揮其“祛瘀生新”的作用。本實驗采用免疫印跡(western-blotting)檢測腦出血大鼠腦內(nèi)TSP-1、TSP-2及CD36蛋白的表達，通過觀察TSP-1、TSP-2及CD36蛋白在腦出血損傷區(qū)的表達規(guī)律及益氣活血中藥干預(yù)后的變化規(guī)律來初步探討益氣活血法在腦出血損傷區(qū)血管重建中的作用機制。 方法：將155只SD大鼠隨機分為正常組、假手術(shù)組、模型組、益氣活血組、益氣組和活血組，立體定位向腦內(nèi)蒼白

5、球注入Ⅶ型膠原酶復(fù)制腦出血模型，對相應(yīng)的組分別灌服補陽還五湯及該方的益氣藥組和活血藥組。各組于造模及灌胃后1d、4d、7d、14d、21d和28d(正常組大鼠于1d)隨機抽取5只大鼠，斷頭法取得腦血腫區(qū)腦組織，采用Western blotting檢測正常組及其它各組各時間點TSP-1、TSP-2及CD36蛋白的表達。實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件處理。 結(jié)果：正常組和假手術(shù)組不同時間點TSP-1、TSP-2和CD36蛋白

6、表達無明顯變化。模型組TSP-1蛋白在腦出血后1d開始表達，4d達高峰，4d-14d逐漸下降，14d-28d各時間點表達無差別。益氣活血組和活血組TSP-1蛋白表達在1d和4d均低于模型組(P<0.01)，益氣組TSP-1蛋白表達在4d低于模型組(P<0.01)；模型組TSP-2蛋白在腦出血后1d開始表達，1d-7d各時間點表達無明顯差別，7d-28d表達呈逐漸上升趨勢并在28d達高峰。益氣活血組TSP-2蛋白表達在14d-21d上升趨

7、勢較其他三組緩慢(P<0.01)，在21d表達較其它三組弱(P<0.01)，在28d表達較其它三組強(P<0.01)；模型組CD36蛋白在腦出血后1d開始表達，4d達高峰，4d-14d逐漸下降，14d-28d開始上升并于28d再次達高峰，4d模型組CD36蛋白表達高于其它三組(P<0.01)，28d益氣活血組CD36蛋白表達高于其它三組(P<0.01) 結(jié)論： 1.腦出血后血腫區(qū)TSP-1蛋白早期表達較強，TSP-2蛋白