基于中藥血清藥理學(xué)與血清藥物化學(xué)方法的頭花蓼抗炎藥效物質(zhì)及作用機制研究.pdf

1、目的：通過探討頭花蓼含藥血清的抗炎作用、作用機制以及作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，了解頭花蓼的抗炎作用及其直接發(fā)揮藥效的物質(zhì)。
　　方法:以血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)為基本方法，以大鼠為含藥血清的供體，采用LPS誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細胞（RAW264.7細胞）建立炎癥損傷模型，以NO、TNF-α釋放量為考察指標評價頭花蓼水提取物含藥血清（ PCWES）、水提醇沉提取物含藥血清（PCAWES）和水提醇沉沉淀物含藥血清（PCAPWES）的抗炎活性，篩選出

2、頭花蓼主要抗炎有效提取物。利用Griess試劑法檢測有效提取物含藥血清對細胞釋放一氧化氮（NO）的影響，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）探討含藥血清對細胞釋放炎癥因子（TNF-α、IL-6）的影響，同時通過實時熒光定量PCR（Real Time-PCR）研究相關(guān)炎癥因子基因（iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA）的表達水平，利用Western blot技術(shù)檢測NF-κB、MAPKs信號通路中關(guān)鍵蛋白（IκB-α、p65以及p38）的表達

3、情況。通過UHPLC-Q-TOF對頭花蓼含藥血清中的主要代謝產(chǎn)物進行分析，并以各含藥血清的質(zhì)譜峰峰高為自變量，其相對應(yīng)的炎癥因子TNF-α釋放抑制率為因變量，進行隨機森林回歸分析，找出對TNF-α釋放抑制率最為重要的色譜峰，并通過色譜峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析和數(shù)據(jù)庫檢索，了解含藥血清中可能發(fā)揮藥效的物質(zhì)。
　　結(jié)果：各提取物含藥血清均不同程度地顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞釋放炎癥因子，其中PCAWES組藥效最強，NO和TNF-

4、α抑制率分別為17.60％和29.90%，顯著優(yōu)于其他含藥血清組（P<0.05）。PCAWES能劑量依賴性地抑制RAW264.7細胞釋放炎癥因子NO、TNF-α和IL-6（P<0.01或P<0.001），并顯著降低iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA的水平（P<0.001），降低炎癥信號NF-κB通路中pI-κBα蛋白的表達，抑制p65由胞漿轉(zhuǎn)移至核內(nèi)（P<0.001），對MAPKs通路中p-p38的蛋白表達無顯著影響。頭花蓼含藥血