酸棗仁湯對基于5-HTR調控老年失眠SCN及VLPO系統的作用及機制研究.pdf

1、目的：整理睡眠剝奪與酸棗仁湯的相關文獻，結合本課題組前期研究基礎，通過建立老年大鼠慢性睡眠剝奪模型，探討酸棗仁湯對老年失眠大鼠下丘腦視交叉上核系統和下丘腦腹外側視前區(qū)系統及兩者投射關系的作用及作用機制。
　　方法：
　　理論探討：查閱睡眠剝奪與酸棗仁湯的相關文獻，對經典的理論內容以及前沿的科學研究進行總結，明確睡眠覺醒調節(jié)機制以及酸棗仁湯的藥效物質基礎，探討酸棗仁湯對睡眠剝奪實驗動物的睡眠調節(jié)機制。
　　實驗探討：選取

2、SPF級SD老年大鼠，用自制睡眠剝奪箱剝奪快動眼睡眠21d，連續(xù)給藥14d，其檢測指標如下：
　　1.酸棗仁湯對老年慢性睡眠剝奪大鼠心肌細胞凋亡及 bcl-2、bax蛋白表達的影響
　　Tunel染色法觀察慢性睡眠剝奪后大鼠心肌細胞凋亡情況，免疫組織化學染色法觀察慢性睡眠剝奪后大鼠心肌細胞bcl-2、bax表達的變化。
　　2.酸棗仁湯對老年慢性睡眠剝奪大鼠SCN系統的影響
　　透射電鏡觀察大腦下丘腦視交叉上核部

3、位形態(tài)學改變。采用免疫組織化學染色法觀察c-fos蛋白表達的變化。
　　免疫組織化學染色法以及Realtime-PCR法觀察SCN中vSPZ和DMH區(qū)內第二信使NO合成酶（nNOS）以及VIP、AVP神經元表達的變化。
　　3.酸棗仁湯對老年慢性睡眠剝奪大鼠VLPO系統的影響
　　免疫組化染色法和免疫熒光染色法觀察甘丙肽表達的變化。
　　尼氏染色法檢測VLPO神經元表達的變化。
　　免疫組化染色法和免疫熒光

4、染色法觀察 GABA表達的變化， Realtime-PCR法檢測下丘腦γ-氨基丁酸A受體（GABAAR）α1和γ2亞單位的表達。
　　采用熒光分光光度法檢測5-HT含量，Realtime-PCR法檢測下丘腦5-HT1AR、5-HT2ARmRNA表達的變化。
　　結果：
　　1.酸棗仁湯對老年慢性睡眠剝奪大鼠心肌細胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表達的影響
　　Tunel染色法觀察心肌凋亡細胞凋亡情況實驗結果與環(huán)境對

5、照組比較，慢性睡眠剝奪模型組凋亡細胞數明顯增加（P<0.05）；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組凋亡細胞數有不同程度的減少（P<0.05）。
　　免疫組織化學染色法觀察 bcl-2、bax表達的結果與環(huán)境對照組比較，慢性睡眠剝奪模型組bcl-2、bax活性均呈現上升趨勢（P<0.05）；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組相bcl-2、bax明顯降低（P<0.05）。
　　2.酸棗仁湯對老年慢性睡

6、眠剝奪大鼠SCN系統的影響
　　SCN形態(tài)超微病理學觀察結果與環(huán)境對照組比較，慢性睡眠剝奪模型組 SCN神經元中脂褐素（Lipo）增多增大，擴張腫脹的 Golgi囊泡明顯增多。與慢性睡眠剝奪組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組則LIPO相對減少并且變小。其中酸棗仁湯組變化最為顯著。
　　與環(huán)境對照組比較，慢性睡眠剝奪模型組nNos、c-fos mRNA表達上調；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組 c-fos、nNos

7、 mRNA表達下調。
　　與環(huán)境對照組比較，慢性睡眠剝奪模型組 VIP、AVP mRNA表達下調，；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組VIP、AVP mRNA表達上調。
　　免疫組織化學染色結果與環(huán)境對照組比較，慢性睡眠剝奪模型組AVP、VIP表達減少，nNos、c-fos表達增加（P<0.05）；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組AVP、VIP表達增加，nNos、c-fos表達減少（P<0.05

8、）。
　　3.酸棗仁湯對老年慢性睡眠剝奪大鼠VLPO系統的影響
　　與環(huán)境對照組比較，慢性睡眠剝奪模型組下丘腦5-HT1AmRNA表達下調，5-HT2AmRNA表達上調；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組下丘腦5-HT1AmRNA表達上調，5-HT2AmRNA表達下調。
　　與環(huán)境對照組比較，慢性睡眠剝奪模型組下丘腦GABAARα1、GABAARγ2 mRNA表達水平上調；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安

9、定組和酸棗仁湯組GABAARα1、GABAARγ2 mRNA表達水平下調。
　　與環(huán)境對照組比較，慢性睡眠剝奪模型組GABA、甘丙肽表達減少（P<0.05）；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組大鼠下丘腦GABA、甘丙肽表達增加（P＜0.05）。
　　熒光分光光度法檢測大鼠下丘腦部位5-HT含量結果分析與環(huán)境對照組相比較，慢性睡眠剝奪模型組5-HT相對表達量降低（P<0.05）。與慢性睡眠剝奪模型組相比較，舒樂安

10、定組和酸棗仁湯組5-HT含量有不同程度的升高（P<0.05）。
　　尼氏染色法檢測VLPO神經元表達結果環(huán)境對照組大鼠VLPO神經元細胞形態(tài)正常，排列緊密，細胞結構完整，細胞核呈圓形或橢圓形，核仁清晰，胞質內可見豐富的尼氏小體。慢性睡眠剝奪后大鼠染色情況發(fā)生明顯變化，細胞排列疏松，部分神經元胞體皺縮，胞質內尼氏小體減少。
　　免疫熒光染色法檢測GABA、甘丙肽表達的結果與環(huán)境對照組相比，慢性睡眠剝奪模型組GABA、甘丙肽神經