拓?fù)涮婵捣聪嘀|(zhì)納米?？诜苿┭芯?pdf

1、拓?fù)涮婵担═PT）是水溶性半合成喜樹堿（CPT）類抗癌藥物，可以特異性抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的功能，阻礙DNA的復(fù)制。目前拓?fù)涮婵瞪鲜袆┬陀型負(fù)涮婵底⑸溆脙龈煞坩槃┖涂诜z囊劑。相比靜脈注射給藥而言，口服 TPT臨床治療有效、方便，且具有較低的骨髓抑制作用，但由于拓?fù)涮婵祷钚詢?nèi)酯結(jié)構(gòu)受pH影響，在中性及堿性條件下易水解開環(huán)為羧酸鹽構(gòu)型，從而失去活性，導(dǎo)致生物利用度降低，抗腫瘤活性下降，所以選擇合適的藥物載體在腸道中對其活性構(gòu)型進(jìn)行保護(hù)顯得尤為

2、重要，另一方面，拓?fù)涮婵悼诜缶哂休^強(qiáng)的胃腸道不良反應(yīng)。本課題針對現(xiàn)有 TPT口服制劑存在的問題，研究制備拓?fù)涮婵捣聪嘀|(zhì)納米粒新劑型，目的是增加藥物在消化道中的穩(wěn)定性同時減少胃腸粘膜刺激，并且提高藥物的口服生物利用度。
　　通過單因素試驗與正交試驗，以透光率、粒徑、澄清度等為指標(biāo)，對反相脂質(zhì)納米粒的膜材種類、用量以及載藥量進(jìn)行了篩選，采用冷凍干燥工藝、以中鏈甘油三酸酯（MCT）為油相制備反相脂質(zhì)納米粒（RLBN-TPT）油溶液，

3、載藥量為4mg/g。通過動態(tài)光散射和透射電鏡對RLBN-TPT制劑進(jìn)行了表征，結(jié)果顯示反相脂質(zhì)納米粒的粒徑為60nm左右，呈均勻球狀。RLBN-TPT制劑在模擬腸液中分散后，對其粒徑和微觀形態(tài)進(jìn)行了觀察，結(jié)果顯示分散后形成均勻球形的脂質(zhì)囊泡或乳滴。在體外穩(wěn)定性評價研究中，建立了高效液相色譜法同時測定拓?fù)涮婵甸_環(huán)、閉環(huán)兩種構(gòu)型的含量。通過測定拓?fù)涮婵捣聪嘀|(zhì)納米粒（RLBN-TPT）在模擬腸液中的釋放，研究拓?fù)涮婵翟谌斯つc液中的穩(wěn)定性，考

4、察反相脂質(zhì)納米粒對藥物的保護(hù)作用。選用 CAPCELL PAK C18 MGⅡ色譜柱（250×4.6 mm,5μm），流動相為A:0.1％三乙胺（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至6.4）-B:乙腈[梯度：0~8min(88%A~60%A);8~17(60%A)]，流速1.0mL/min，檢測波長360nm，柱溫55℃。結(jié)果表明開環(huán)、閉環(huán)構(gòu)型濃度在0.25~5.00μg·mL-1范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，該方法回收率高，準(zhǔn)確度好。與拓?fù)涮婵?/p>

5、水溶液比較，反相脂質(zhì)納米粒中的拓?fù)涮婵翟谀c液中的穩(wěn)定性明顯增強(qiáng)，開環(huán)構(gòu)型產(chǎn)生的速率明顯減小（p<0.05），表明反相脂質(zhì)納米粒對藥物活性內(nèi)酯形式具有一定保護(hù)作用，有效避免其在短時間內(nèi)的水解開環(huán)，增強(qiáng)拓?fù)涮婵翟谀M腸液中的穩(wěn)定性。
　　建立了HPLC法測定RLBN-TPT制劑中拓?fù)涮婵档暮?，方法學(xué)研究表明，拓?fù)涮婵捣迕娣e和濃度在0.125μmg·mL-1～125μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，且高、中、低的回收率均在98%-

6、102%之間，RSD為0.67%，該方法準(zhǔn)確、精密度高、專屬性強(qiáng)、靈敏度高，可以用于制劑中拓?fù)涮婵岛康臏y定；又建立了HPLC法測定 RLBN-TPT制劑中拓?fù)涮婵档挠嘘P(guān)物質(zhì)，方法學(xué)研究表明該方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、精密度高，可以用于制劑中拓?fù)涮婵涤嘘P(guān)物質(zhì)的測定。通過影響因素試驗結(jié)果可知，RLBN-TPT制劑對濕、熱比較敏感，所以在儲存過程中應(yīng)避免高溫，注意防潮；加速試驗表明，RLBN-TPT制劑批次間重現(xiàn)性較好，外觀、粒徑、含量和溶出

7、度均無顯著變化且無藥物析出，有關(guān)物質(zhì)稍有增加，本品包裝及長期穩(wěn)定性還需進(jìn)一步考察。
　　在藥代動力學(xué)實驗中，建立了LC-MS/MS法測定Wistar大鼠體內(nèi)拓?fù)涮婵笛帩舛?，血漿中藥物濃度在1.0~200 ng/mL（r2>0.997）范圍，與峰面積比之間呈良好的線性關(guān)系，確定定量下限為1.0 ng/mL，方法回收率高，準(zhǔn)確度好，滿足Wistar大鼠體內(nèi)血藥濃度測定要求。以上市拓?fù)涮婵的z囊劑為參比制劑，比較了RLBN-TPT制劑在

8、Wistar大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征。結(jié)果表明，RLBN-TPT制劑的Cmax和AUC0-∞分別是市售制劑的1.61倍和1.57倍，顯著提高了藥物的口服生物利用度。為進(jìn)一步闡明反相脂質(zhì)納米粒的吸收途徑，比較了阻斷淋巴吸收途徑前后兩種制劑的體內(nèi)吸收行為，結(jié)果表明，阻斷后反相脂質(zhì)納米粒AUC顯著下降，下降至阻斷前的30%，市售制劑下降為阻斷前的63%，由此可以說明 RLBN-TPT制劑通過增加藥物的淋巴吸收，從而提高了藥物的口服生物利用度。

9、
　　建立了BALB/c荷瘤裸鼠的HepG2實體瘤動物模型，結(jié)果顯示，RLBN-TPT組和上市制劑的抑瘤率分別為44.08%和16.3%，通過TUNEL染色觀察腫瘤細(xì)胞凋亡、H＆E染色觀察腫瘤組織凋亡情況，并對腫瘤組織進(jìn)行病理學(xué)分析，結(jié)果表明，RLBN-TPT制劑組腫瘤細(xì)胞死亡面積更大，腫瘤組織大面積壞死。表明相比于市售制劑，RLBN-TPT制劑能夠更好地抑制腫瘤生長，具有更強(qiáng)抗腫瘤活性。
　　在腸道刺激性試驗中，比較了 R

10、LBN-TPT制劑組與市售膠囊制劑組小鼠空腸的病變程度。由結(jié)果可知，服用市售制劑后小鼠腸黏膜層表面可見明顯水腫、脫失，以及血管充血，表明制劑對胃腸道具有較高的刺激性，而服用RLBN-TPT制劑后小鼠腸壁黏表層僅偶見水腫現(xiàn)象，其壁黏膜層及黏膜下、漿膜層、腸壁全層結(jié)構(gòu)清晰，微絨毛其柱狀上皮及杯狀細(xì)胞等細(xì)胞成分分布均勻，表明 RLBN-TPT制劑相較于市售膠囊制劑，降低了口服TPT腸道刺激性。
　　綜上所述，RLBN-TPT制劑能夠顯著