“短刺加電針法”對膝骨關(guān)節(jié)炎模型兔軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的修復(fù)作用研究.pdf

1、目的:觀察“短刺加電針法”對膝骨關(guān)節(jié)炎模型兔血清中CTX-II、PIICP含量與膝關(guān)節(jié)軟骨中II型膠原(Collagen Type II)—盤狀結(jié)構(gòu)域受體（discoidin domain receptor,DDR）-2基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）13信號通路的影響，探討該治療方法修復(fù)膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的可能作用機(jī)制。
　　方法:將40只新西蘭大白兔隨機(jī)分為正常組（10只）和造模組（

2、30只），造模組動物采用 Hulth-Telhag法手術(shù)復(fù)制膝骨關(guān)節(jié)炎模型，Lequesne MG膝關(guān)節(jié)級別評估法對各組兔進(jìn)行評價，X線評估造模結(jié)果。將造模成功的動物隨機(jī)分為3組，即模型組、短刺組、普通針刺組，每組10只。短刺組采用短刺加電針法，普通針刺組采用常規(guī)針刺加電針法治療，均選取“內(nèi)膝眼”、“犢鼻”、“陰陵泉”、“足三里”和“梁丘”進(jìn)行針刺。正常組和模型組正常抓取、固定，不予以干預(yù)。每次治療20min，每日1次，5d為一療程，每

3、個療程間隔2d，共治療4個療程。療程結(jié)束后，Lequesne MG法再次評估各組兔膝關(guān)節(jié)級別，并對各組動物進(jìn)行膝關(guān)節(jié)半月板及軟骨取材。行HE染色，于光鏡下觀察軟骨細(xì)胞的變化；行鉛鈾雙重染色，于透射電鏡下觀察關(guān)節(jié)軟骨超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的變化。采用蛋白免疫印跡法檢測軟骨DDR2、II型膠原、MMP13的蛋白表達(dá)；免疫組化法檢測軟骨DDR2、II型膠原、MMP13的表達(dá)；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測DDR2和MMP13的mRNA表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸

4、附測定法檢測血清PIICP、CTX-II含量。
　　結(jié)果:
　　1.X線結(jié)果顯示，造模組兔膝關(guān)節(jié)較正常組改變明顯，造模組兔膝關(guān)節(jié)對線不良，內(nèi)側(cè)關(guān)節(jié)間隙狹窄，關(guān)節(jié)面粗糙變形，關(guān)節(jié)邊緣有骨贅形成。
　　2.光鏡下觀察HE染色結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組軟骨細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞成簇出現(xiàn)，細(xì)胞核裂解退化明顯；與模型組相比，短刺組和普通針刺組軟骨細(xì)胞排列尚齊，成簇存在。透射電鏡檢查結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組軟骨細(xì)胞核固縮，細(xì)

5、胞外基質(zhì)中膠原纖維排列不齊或降解；與模型組相比，短刺組和普通針刺組軟骨細(xì)胞核形態(tài)較正常，基質(zhì)中膠原纖維較豐富。
　　3.Lequesne MG評分結(jié)果顯示，造模后6周，模型組、短刺組和普通針刺組兔膝關(guān)節(jié)均出現(xiàn)強(qiáng)烈的局部疼痛反應(yīng)，關(guān)節(jié)腫脹明顯且活動度多在15-45度。與正常組相比，模型組、短刺組和普通針刺組Lequesne MG評分均顯著增高（P＜0.01）；造模后10周，短刺組和普通針刺組兔膝關(guān)節(jié)局部疼痛刺激反應(yīng)、膝關(guān)節(jié)腫脹程度均

6、減輕，活動度可達(dá)45-90度。與造模后6周同組別兔Lequesne MG評分相比均明顯降低（P＜0.01）。
　　4.Western-Blot、免疫組化、RT-PCR、ELISA結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組、短刺組和普通針刺組兔血清中PIICP含量與膝關(guān)節(jié)軟骨中 II型膠原的蛋白表達(dá)等均明顯減少（均P＜0.01），而血清中CTX-II含量與膝關(guān)節(jié)軟骨中DDR2、MMP13的蛋白及mRNA表達(dá)均明顯增加（均P＜0.01）；治療后，

7、短刺組和普通針刺組兔血清中PIICP含量與膝關(guān)節(jié)軟骨中II型膠原的蛋白表達(dá)等較模型組明顯增多（均P＜0.01），而血清中CTX-II含量與膝關(guān)節(jié)軟骨中DDR2、MMP13的蛋白及mRNA表達(dá)較模型組均明顯減少（均P＜0.01）；與普通針刺組相比，短刺組兔血清中PIICP含量與膝關(guān)節(jié)軟骨中II型膠原的蛋白表達(dá)增多（P＜0.01），而血清中CTX-II含量與膝關(guān)節(jié)軟骨中DDR2、MMP13的蛋白及mRNA表達(dá)減少（均P＜0.01）。