α-硫辛酸對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠的治療作用及Nrf2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：多發(fā)性硬化（multiple sclerosis,MS）是一種導(dǎo)致青年人殘疾的常見的自身免疫性脫髓鞘疾病，具體的發(fā)病機(jī)制不清，遺傳和環(huán)境等多種因素的共同作用參與并誘導(dǎo)了MS的發(fā)病，近年來，氧化應(yīng)激（oxidative stress,OS）作為MS的發(fā)病機(jī)制之一日益引起人們的關(guān)注。
　　核因子 E2相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid2 related factor2,Nrf2）屬于cap‘n’coll

2、ar（CNC）家族中的一種核轉(zhuǎn)錄因子。在阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD）、帕金森?。≒arkinson’s disease,PD）、肌萎縮側(cè)索硬化癥（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）及多發(fā)性硬化（MS）等疾病中，Nrf2能夠與抗氧化反應(yīng)原件（antioxidant response element,ARE）結(jié)合，提高機(jī)體的抗氧化應(yīng)激能力，從而增強(qiáng)細(xì)胞保護(hù)、減輕神經(jīng)損傷、延緩

3、病情進(jìn)程。Nrf2作為調(diào)節(jié)內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子正逐漸成為人們研究的焦點(diǎn)，為治療提供了新的方向。
　　α-硫辛酸（alpha lipoic acid,α-LA）是一種天然抗氧化劑，本實(shí)驗(yàn)使用α-LA對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠進(jìn)行干預(yù)，通過觀察EAE小鼠的神經(jīng)功能缺損評分、體重及精神狀態(tài)、活動度等臨床表現(xiàn)的改變和小鼠脊髓腰膨

4、大組織Nrf2的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討α-LA對EAE小鼠的治療和保護(hù)作用、對Nrf2表達(dá)的影響及其在EAE小鼠中發(fā)揮抗氧化應(yīng)激的相關(guān)機(jī)制，為臨床治療MS提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.建立EAE模型使用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG）多肽片段作為抗原免疫，神經(jīng)功能缺損評分大于或等于0.5分為模型成功。
　　2.實(shí)驗(yàn)動物及分組將發(fā)病后的

5、C57BL/6小鼠36只隨機(jī)分為EAE組、α-硫辛酸組，每組各18只；另隨機(jī)選取18只正常小鼠為正常對照組（normal control group,NC group）。
　　3.干預(yù)方法NC組、EAE組：每日腹腔注射等體積的二甲基亞砜（dimethyl sulphoxide,DMSO），共注射14天；α-LA組：每日腹腔注射α-硫辛酸15mg/kg/d。
　　4.觀察指標(biāo)分別于發(fā)病后第0天、第7天及第14天觀察C57BL/

6、6小鼠自免疫后的神經(jīng)功能缺損評分、體重、精神狀態(tài)、活動情況等臨床表現(xiàn)；隨后處死小鼠取脊髓腰膨大組織，使用HE染色和免疫組織化學(xué)染色的方法觀察小鼠脊髓腰膨大的組織病理學(xué)結(jié)果，即炎性細(xì)胞浸潤程度及Nrf2的表達(dá)情況，用實(shí)時熒光定量 PCR法測定小鼠脊髓腰膨大組織Nrf2mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.各組小鼠發(fā)病的一般情況和臨床表現(xiàn)：NC組小鼠精神正常、食欲正常、毛色光澤、活動靈活自如、體重逐漸增加；α-LA組、EAE

7、組小鼠自免疫后第10天左右均開始發(fā)病，出現(xiàn)體重下降、尾部及肢體癱瘓、精神差、食欲差、毛色黯淡、活動減少等癥狀，α-LA組小鼠上述癥狀較EAE組小鼠減輕。
　　2.各組小鼠發(fā)病第7天體重：EAE組和α-LA組小鼠體重較NC組均有所下降（P<0.05），但EAE組小鼠體重減輕程度較α-LA組更為明顯（P<0.05）。
　　3.各組小鼠發(fā)病第7天神經(jīng)功能缺損評分：EAE組及α-LA組小鼠神經(jīng)功能缺損評分明顯高于NC組（P<0.05

8、），且EAE組小鼠神經(jīng)功能缺損程度最重（P<0.05）。
　　4.HE染色：EAE0天組（EAE0）、EAE7天組（EAE7）以及EAE14天組（EAE14）小鼠脊髓腰膨大組織均存在炎性細(xì)胞浸潤；其中，以EAE7天組炎性細(xì)胞浸潤程度最為顯著。α-LA0天組（α-LA0）、α-LA7天組（α-LA7）和α-LA14天組（α-LA14）小鼠炎性細(xì)胞浸潤程度較輕，炎性病灶數(shù)明顯減少。
　　5.免疫組織化學(xué)染色：EAE0、EAE7、

9、EAE14小鼠脊髓腰膨大組織Nrf2陽性細(xì)胞數(shù)低于NC組（P<0.05）；α-LA7、α-LA14 Nrf2陽性細(xì)胞數(shù)較正常對照組增多（P<0.05）；α-LA7 Nrf2陽性細(xì)胞數(shù)高于EAE7天組（P<0.05）；α-LA14 Nrf2陽性細(xì)胞數(shù)高于EAE14天組（P<0.05）。
　　6.實(shí)時熒光定量PCR：EAE14小鼠脊髓腰膨大組織Nrf2mRNA的表達(dá)量低于NC組（P<0.05）；α-LA7小鼠脊髓腰膨大組織Nrf2mR

10、NA的表達(dá)較EAE7明顯升高（P<0.05）；而α-LA14與EAE14的Nrf2mRNA的表達(dá)量無明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.體重下降對EAE小鼠發(fā)病具有提示作用；神經(jīng)功能缺損評分對病情嚴(yán)重程度具有評價作用；α-硫辛酸能夠改善EAE小鼠的精神狀態(tài)、食欲、活動度等臨床表現(xiàn)，減輕EAE小鼠體重下降程度，并降低其神經(jīng)功能缺損評分，對EAE小鼠具有治療和保護(hù)作用。
　　2.Nrf2是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化應(yīng)激