細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境中凝溶膠蛋白水平對中性粒細(xì)胞趨化功能的影響.pdf

1、第一部分：
　　目的：研究凝溶膠蛋白（Gelsolin，GSN）自身對大鼠離體多形核嗜中性粒細(xì)胞（Polymorphonuclear neutrophil，PMN）是否具有趨化作用。
　　方法：成年SD大鼠，麻醉后采集靜脈血液標(biāo)本，采用Ficoll密度梯度離心、葡聚糖沉降、紅細(xì)胞裂解法分離 PMN。在 Transwell細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中進(jìn)行趨化實(shí)驗(yàn)。PMN接種于上室，在下室培養(yǎng)基中加入重組凝溶膠蛋白，觀察趨化至下室的PMN數(shù)量

2、并計(jì)算趨化指數(shù)，研究凝溶膠蛋白自身對PMN是否具有趨化功能。
　　結(jié)果：在Transwell細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)下室加入凝溶膠蛋白，趨化至下室的PMN數(shù)量和趨化指數(shù)均沒有明顯改變(P＞0.05)。
　　結(jié)論：凝溶膠蛋白本身對大鼠離體PMN沒有趨化作用。
　　第二部分：
　　目的：研究細(xì)胞外環(huán)境凝溶膠蛋白水平變化對趨化肽 fMLP（N-formylmethionyl-leucyl-phenylalanine）誘導(dǎo)的PMN趨

3、化功能的影響。
　　方法：成年SD大鼠，麻醉后采集靜脈血。采用Ficoll密度梯度離心、葡聚糖沉降、紅細(xì)胞裂解法分離 PMN。在 Transwell細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中進(jìn)行趨化實(shí)驗(yàn)，PMN接種于上室并在上室培養(yǎng)基中加入重組凝溶膠蛋白，下室培養(yǎng)基中加入fMLP，觀察趨化至下室的PMN數(shù)量并計(jì)算趨化指數(shù)，研究細(xì)胞外凝溶膠蛋白水平改變對fMLP誘導(dǎo)的PMN趨化功能的影響。
　　結(jié)果：在Transwell細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)上室加入凝溶膠蛋白，趨

4、化至下室的PMN數(shù)量和趨化指數(shù)均沒有明顯改變(P＞0.05)。
　　結(jié)論：細(xì)胞外環(huán)境中凝溶膠蛋白水平改變，不影響 fMLP誘導(dǎo)的PMN趨化能力。
　　第三部分：
　　目的：研究細(xì)胞內(nèi)凝溶膠蛋白水平變化對趨化肽 fMLP誘導(dǎo)的PMN趨化功能的影響。
　　方法：成年SD大鼠，麻醉后采集靜脈血液標(biāo)本，采用Ficoll密度梯度離心、葡聚糖沉降、紅細(xì)胞裂解法分離PMN。采用電穿孔法向PMN中分別轉(zhuǎn)入凝溶膠蛋白或其抗體。在T

5、ranswell細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行fMLP誘導(dǎo)趨化實(shí)驗(yàn)，觀察趨化至下室的PMN數(shù)量并計(jì)算趨化指數(shù)，研究細(xì)胞內(nèi)凝溶膠蛋白水平改變對fMLP誘導(dǎo)的PMN趨化功能的影響。
　　結(jié)果：向PMN中轉(zhuǎn)入凝溶膠蛋白，趨化至下室的PMN數(shù)量和趨化指數(shù)均沒有明顯改變(P＞0.05)；但向PMN中轉(zhuǎn)入凝溶膠蛋白抗體，趨化至下室的PMN數(shù)量減少，趨化指數(shù)降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論：向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入外源性凝溶膠蛋白不影響fMLP誘導(dǎo)的PMN趨化能力