擬南芥一具亮氨酸拉鏈的轉錄因子的功能研究與表達分析.pdf

1、轉錄因子(Transcription factor，TF)又稱反式作用因子，是一群能與真核基因啟動子區(qū)域中的順式作用元件發(fā)生特異性結合，從而保證目的基因以特定的強度、在特定的時間與空間表達的蛋白質分子。當植物感受外界干旱、高鹽、激素、病害時，通過一系列信號傳遞，激發(fā)轉錄因子，轉錄因子與相應的順式作用元件結合后，激活RNA聚合酶Ⅱ轉錄復合物，從而啟動特定基因的轉錄表達，最后通過基因產物的作用對內、外界信號做出的調節(jié)反應Ⅲ。植物許多基因的表

2、達都是由特定的轉錄因子與特定的順式作用元件相互作用調控的。 轉錄因子根據表達的特點可以分為兩種，一種是組成型轉錄因子，無論在逆境還是正常狀況下基因都表達。組成型轉錄因子的基因表達不受外界影響，但在無逆境時蛋白成惰性狀態(tài)或活性很低，逆境狀態(tài)下其空間結構發(fā)生改變或將其磷酸化，激發(fā)其下游靶基因啟動子核心序列的結合活性，下游基因才能表達。另一種是誘導型轉錄因子，只有在逆境下基因才會表達，絕大部分的轉錄因子都是這種自身的反饋調節(jié)。誘導型轉

3、錄因子是逆境誘導其表達，然后進一步啟動其下游功能基因的表達。但是，細胞如何感知外界逆境信號，如何進一步將逆境信號傳導給轉錄因子，轉錄因子如何調控其下游靶基因，目前仍然缺乏足夠的信息和證據來描述一個相對完整和清晰的植物轉錄因子應答脅迫的信號系統(tǒng)。 bZIP家族的轉錄因子是與植物逆境抗性相關的轉錄因子家族。植物堿性亮氨酸拉鏈(bZIP)蛋白是一類重要的植物轉錄因子，bZIP類轉錄因子識別核心序列ACGT的順式作用元件為CACGTG(

4、G 盒)、CACGTC(C 盒)、TACGTA(A 盒)等，一些受ABA誘導的基因的啟動子區(qū)都含有這些元件[3]。其中G盒元件普遍存在于受ABA，生長素，茉莉酸，水楊酸誘導的基因中，例如在擬南芥bZIP家族中，G盒結合因子(GBF1、GBF2和GBF3)有相似的ABA豐富區(qū)，使它們有相似的功能，而且三個bZIP蛋白之間還能形成異二聚體，異二聚體的多樣性為GBF蛋白功能多樣性提供了基礎[4]。 酵母中發(fā)現了bZIP家族的轉錄因子與

5、酵母的抗氧化性相關，植物中的轉錄因子at3g51960與酵母中的這一轉錄因子在空間結構上有很高的同源性，為了驗證它在體內的功能，本實驗構建了過量表達載體和沉默載體，利用花浸染法把農桿菌攜帶的雙元表達載體，pCAMBTA3301：at3g51960，pCAMBTA3301：at3g51960Promoter和IpCAMBTA3301：at3g51960-GFP及pCAMBTA3301：at3g51960 eDNA轉入擬南芥，通過多次篩選已