靶向CD138嵌合抗原受體的表達優(yōu)化及其對多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細胞殺傷影響.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)是第二常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，克隆性漿細胞在骨髓及髓外病灶積聚，并最終引起腎衰竭，免疫抑制伴反復感染，貧血以及骨質損傷。盡管MM的治療有了長足的進步，但至今仍是不可治愈的惡性疾病，絕大多數(shù)的患者最終會復發(fā)或進展。嵌合抗原受體修飾的T細胞(Chimeric antigen receptors modified T cells，CAR-T)已成為當下腫瘤免疫治療和靶向治療的研究熱點，尤其

2、是靶向CD19 CAR-T細胞治療在CD19陽性B細胞惡性腫瘤中取得的顯著療效。CARs技術在MM治療領域的應用研究可能為MM患者的預后帶來新的希望。
　　目的:本研究選擇了CD138作為靶點設計對應的CAR結構，通過更換具有更高表達活性的啟動子優(yōu)化載有CAR基因片段的基因載體，增加CARs的表達水平，比較優(yōu)化前后的CAR-T細胞對CD138陽性MM細胞系RPMI8226的殺傷活性。
　　方法:(1)構建載有CAR基因及不同

3、啟動子的基因載體;(2)驗證啟動子對下游CAR基因的表達活性;(3)制備優(yōu)化前后兩組靶向CD138 CAR-T細胞、流式細胞術檢測;(4)將靶向CD138 CAR-T細胞與RPMI8226細胞共培養(yǎng)、檢測殺傷活性。
　　結果:(1)成功構建了本試驗所需要的基因載體;(2)優(yōu)化后基因載體具有更高表達活性;(3)成功制備了優(yōu)化前后兩組靶向CD138 CAR-T細胞，陽性率分別為13.32％與10.16％;(4)在不同效靶比的情況下，C

4、AR-T組的殺傷活性均高于CIK組，且P＜0.05，具有顯著差異;不同效靶比下，PWPXL-CAR-T組的殺傷活性均高于PWPT-CAR-T組，T檢驗P＞0.05，差異不顯著。
　　結論:(1)啟動子EF-1α比EF-1α-short具有更高的表達活性，可以用于增加CAR-T細胞表面CARs的表達水平，說明在啟動子水平優(yōu)化CAR基因載體以提高細胞表面CARs表達水平是可行的;(2)本研究成功制備了優(yōu)化前后兩組靶向CD138 CAR