RNA結(jié)合蛋白QKI-5、SLC16A3和Ezrin在漿液性卵巢癌中的表達(dá)特點(diǎn)及功能機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中，上皮性卵巢癌發(fā)病率位居第三。由于卵巢癌缺乏明顯的早期臨床表現(xiàn)且臨床上無特異敏感的早期診斷指標(biāo)，研究表明臨床上超過75％的卵巢癌患者在初診時(shí)已達(dá)晚期，而卵巢癌晚期患者往往具有易復(fù)發(fā)性和藥物耐受性，因此根據(jù)臨床統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示卵巢癌患者的五年生存率僅25％-50％。
　　RNA結(jié)合蛋白是近年來研究發(fā)現(xiàn)的具有重要生物學(xué)功能的分子家族，其能通過調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)水平影響細(xì)胞的生物學(xué)特性，參與人體許多

2、生理病理進(jìn)程，其中腫瘤的生物學(xué)進(jìn)程是當(dāng)今社會(huì)的研究重點(diǎn)和科研難點(diǎn)。QKI編碼蛋白屬于RNA結(jié)合蛋白，其能通過與mRNA上的QKI反應(yīng)原件(QREs)結(jié)合從而影響mRNA的穩(wěn)定及表達(dá)，調(diào)控RNA的轉(zhuǎn)錄和分布。研究表明，QKI-5的缺失或部分缺失能影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，且在肺癌，結(jié)直腸癌，口腔癌，胃癌，乳腺癌等癌癥中QKI-5都存在明顯的表達(dá)下調(diào)，相關(guān)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)，QKI-5的表達(dá)下調(diào)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要的意義。Ezrin和S

3、LC16A3分別作為重要的膜-細(xì)胞骨架蛋白和膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白也在腫瘤的生物學(xué)進(jìn)程中扮演重要的角色，研究表明SLC16A3和Ezrin在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀乳腺癌、前列腺癌和骨肉瘤等惡性腫瘤中存在明顯的差異表達(dá)，Ezrin能通過改變細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路等途徑參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展而SLC16A3則通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的乳酸濃度影響腫瘤細(xì)胞的代謝水平最終影響其存活狀態(tài)。然而，在卵巢癌中QKI-5、SLC16A3和Ezri

4、n的相關(guān)性研究卻很少，且缺乏相應(yīng)的機(jī)制研究。
　　方法：
　　1、采用組織芯片技術(shù)檢測QKI-5、Ezrin和SLC16A3在134例漿液性卵巢癌組織和18例正常的卵巢搔刮上皮細(xì)胞中的差異表達(dá)情況，并通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析各個(gè)基因表達(dá)趨勢與臨床病理的相關(guān)性。
　　2、采用Q-PCR技術(shù)檢測40例新鮮卵巢癌組織樣品和27例正常卵巢上皮細(xì)胞中QKI-5、Ezrin和SLC16A3在mRNA水平的差異表達(dá)。。
　　3、構(gòu)建

5、QKI-5和SLC16A3的過表達(dá)及敲低質(zhì)粒，采用增殖、侵襲、遷移、周期以及凋亡實(shí)驗(yàn)檢測其對A2780和SKOV3細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用。通過藥物敏感實(shí)驗(yàn)檢測SLC16A3對卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780鉑類化療藥物耐藥性的影響。
　　4、通過裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)和NOD/SCID鼠尾靜脈轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)分別檢測QKI-5對卵巢癌細(xì)胞成瘤性以及血運(yùn)轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、在134例卵巢癌病例調(diào)查中發(fā)現(xiàn)QKI-5和Ezr

6、in的表達(dá)明顯低于正常對照組，QKI-5和EZRIN的表達(dá)下調(diào)與卵巢癌患者的分期、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移情況、生存時(shí)間有重要的相關(guān)性(p＜0.05)。而SLC16A3在卵巢癌中表達(dá)明顯上調(diào)，且其表達(dá)上調(diào)的患者具有更強(qiáng)的化療藥物耐受性(p＜0.05)。
　　2、Q-PCR結(jié)果顯示：與正常卵巢上皮相比，QKI-5和Ezrin在卵巢癌組織中呈下調(diào)表達(dá)，而SLC16A3則明顯表達(dá)上調(diào)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在SKOV

7、3和A2780細(xì)胞中QKI-5能增加細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，并能增加細(xì)胞G1期比例;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：上調(diào)表達(dá)QKI-5能降低卵巢癌細(xì)胞系的成瘤能力并能減弱其血行轉(zhuǎn)移能力。
　　4、SLC16A3能增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的增殖能力，并且能加強(qiáng)癌細(xì)胞穿過組織間隙和血管壁的能力，上調(diào)細(xì)胞S期比例，SLC16A3能通過增強(qiáng)SKOV3和A2780對鉑類藥物的耐藥性，促進(jìn)腫瘤的生長和抗凋亡能力。
　　結(jié)論：
　　1、QKI-5、Ez