mROs-TXNIP-NLRP3信號(hào)通路在急性腎臟損傷中的作用研究.pdf

1、目的：
　　急性腎臟損傷(acute kidney injury，AKI)是一種常見(jiàn)的臨床急重癥，其病因以腎臟缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)為主，突出表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞損傷及間質(zhì)炎癥浸潤(rùn)。近期研究發(fā)現(xiàn)，線粒體功能障礙在AKI發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，線粒體功能障礙可以激活NLRP3炎性小體，加重腎臟炎癥反應(yīng)。本研究旨在通過(guò)體內(nèi)、外研究，探討NLRP3炎性小體活化在缺血性AKI的作

2、用及其激活機(jī)制。
　　方法：
　　研究分為體內(nèi)、體外兩部分。將NLRP3敲除雜合子雌雄小鼠合籠，并篩選出同窩野生型和純合子敲除雄性小鼠培育至8周齡。野生型和純合子敲除小鼠分別分為對(duì)照組及模型組，模型組小鼠腎臟進(jìn)行缺血再灌注處理，并留取相應(yīng)血、尿及腎組織標(biāo)本。體外研究選用人近端腎小管上皮細(xì)胞(human proximal tubularepithelial cell line，HK-2)，建立細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷模型，應(yīng)用Mito

3、TEMPO或siRNA技術(shù)干預(yù)細(xì)胞。通過(guò)Western Blot、免疫組化、免疫共沉淀、熒光共聚焦等檢測(cè)組織，細(xì)胞內(nèi)腎臟損傷指標(biāo)、線粒體損傷指標(biāo)，TXNIP及NLRP3炎性小體信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)和相互作用情況。
　　結(jié)果：
　　與野生型對(duì)照組相比，野生型模型組小鼠表現(xiàn)出顯著的腎小管壞死、線粒體形態(tài)改變、功能障礙和大量線粒體源性ROS(mitochondrial derived ROS，mROS）產(chǎn)生，NLRP3炎性小體通路

4、相關(guān)蛋白表達(dá)顯著升高。敲除NLRP3基因可顯著保護(hù)腎功能。體外研究結(jié)果表明，缺氧復(fù)氧損傷呈時(shí)間依賴性激活HK-2細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎性小體通路，抑制NLRP3基因表達(dá)可顯著保護(hù)腎小管上皮細(xì)胞。體外研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，缺氧復(fù)氧損傷誘導(dǎo)小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)TXNIP表達(dá)上調(diào)，TXNIP與NLRP3存在相互作用。TXNIP siRNA可抑制NLRP3炎性小體活化。應(yīng)用mROS清除劑MitoTEMPO可抑制NLRP3與TXNIP結(jié)合，使NLRP3炎性小