脂氧素A4與轉(zhuǎn)化生長因子-β1在惡性黑色素瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用研究.pdf

1、目的：惡性黑色素瘤（malignant melanoma, MM）是人類死亡率最高的腫瘤之一，而目前對晚期MM尚無有效的治療手段。脂氧素（Lipoxins, LXs）是一類脂氧合酶作用于花生四烯酸后的代謝產(chǎn)物，具有促進炎癥消退的作用，在多種腫瘤實驗中表現(xiàn)出抗腫瘤特性。轉(zhuǎn)化生長因子-β1（Transforming growth factor beta1, TGF-β1）是一種多功能調(diào)節(jié)生長因子，參與調(diào)控細(xì)胞的生長、分化，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展

2、有著密切關(guān)系。本實驗擬對脂氧素A4（Lipoxin A4, LXA4）和TGF-β1在體外MM的發(fā)生、發(fā)展中的作用進行初步探討。
　　方法：采用免疫組化SP法檢測正常皮膚和MM患者病變皮損中LXA4受體（lipoxin A4 receptor, ALX）和TGF-β1蛋白的表達水平。體外培養(yǎng)A375細(xì)胞（人惡性黑色素瘤細(xì)胞株），分組給予完全培養(yǎng)基、LXA4 factor（400nM）、TGF-β1 factor（50ng/ml）和

3、兩者共同刺激后，采用CCK8細(xì)胞增殖實驗檢測A375細(xì)胞的增殖情況，Transwell細(xì)胞侵襲實驗檢測MM細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力，以及流式細(xì)胞儀凋亡實驗檢測MM細(xì)胞的凋亡情況。同時，應(yīng)用Western Blot實驗和qRT-PCR實驗，分別從蛋白翻譯和mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測A375細(xì)胞中ALX和TGF-β1的表達情況。所有實驗結(jié)果均采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示，ALX、TGF-β1在MM組織中的表達

4、均顯著高于正常皮膚組織（p<0.05）。CCK-8細(xì)胞增殖實驗結(jié)果顯示，各時間點正常對照組生存率均較其余實驗組高（p<0.05）。各組Transwell實驗結(jié)果表明，TGF-β1 factor組侵襲細(xì)胞數(shù)量高于正常對照組，LXA4 factor組則低于正常對照組（p<0.05）。流式細(xì)胞儀凋亡實驗結(jié)果顯示，LXA4 factor組凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯多于正常對照組（p<0.001）。在Western Blot實驗和qRT-PCR實驗中可以見

5、到，LXA4作用細(xì)胞后ALX轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均較正常對照組明顯增加（p<0.05），細(xì)胞 TGF-β1轉(zhuǎn)錄和翻譯水平則均較正常對照組有下降（p<0.05）；而TGF-β1作用于A375細(xì)胞后ALX轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均較正常對照組有一定程度的下降（p>0.05），細(xì)胞 TGF-β1轉(zhuǎn)錄和翻譯水平則均較正常對照組增加（p<0.05）。
　　結(jié)論：LXA4、TGF-β1與MM的發(fā)生、發(fā)展具有一定程度上的相關(guān)性；LXA4一定程度上抑制了MM細(xì)胞