銅綠假單胞菌中Ⅲ型分泌系統(tǒng)受Rh1和PQS群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié).pdf

1、西北大學(xué)碩士學(xué)位論文銅綠假單胞菌中Ⅲ型分泌系統(tǒng)受Rh1和PQS群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)姓名：孔偉娜申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：段康民20090610R e g u l a t i o no f T y p e I I Is e c r e t i o ns y s t e m b y R h la n d P Q SQ u o r u m s e n s i n g s y s t e m si nP s e u d

2、o m o n a s a e r u g i n o s aA b s t r a c tP s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a i s a m a j o ro p p o r t u n i s t i c p a t h o g e nc a p a b l eo f c a u s i n g a v a r i e t yo fs o f tt i s s u e i n f e

3、c t i o n si n s u s c e p t i b l eh o s t s ．A n di t b e c o m e s a h o tp o t m o o nc l i n i c a l t h e r a p yw i m t h e i n c r e a s i n g o f i n t r i n s i c r e s i s t a n t t oa l a r g e n u m b e r o

4、f a n t i b i o t i c s ．I nP s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a ，b o t hQ u o r u m s e n s i n g ( Q S ) s y s t e ma n dT y p eI I Is e c r e t i o ns y s t e m ( T 3 S S ) a r e i m p o r t a n t t o i n f e c t

5、i o na n d p a t h o g e n i c i t y o f t h e p a t h o g e n ，S Oi t i sn e c e s s a r yt o i n v e s t i g a t et h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e nQ Sa n dT 3 S S 。F o rt h i so b j e c t i v e ，w ec o n s t

6、r u c t e ds e v e r a lQ Sg e n ek n o c k o u tm u t a n t s ．T h ep r o m o t e r so ft h eT 3 S Sg e n e s ，e x o S ，e x o Y , e x o T ,膩s 轉(zhuǎn)．侈S e A ．Lw e r ec l o n e d a n df u s e du p s t r e a m o ft h el u m i n

7、 e s c e n c er e p o r t e r g e n ec l u s t e r ,l u x C D A B E ．T h er e p o r t e r c o n s t r u c t sw e r e i n t e g r a t e d o n t h e c h r o m o s o m e i nt h e w i l d t y p e s t r a i nP A 0 1a n d t h

8、e Q Sm u t a n t s r e s p e c t i v e l y , a n dt h e e x p r e s s i o no f t h eT 3 S S g e n e s i nt h e s es t r a i n sw a s c o m p a r e d 。A sm o n i t o r e dt h r o u g h l u c i f e r a s er e p o r t e rf

9、u s i o n ，t h ee x p r e s s i o no f e x o Sa n de x o T i np q s Rm u t a n tw e r ef o u n d t o i n c r e a s es i g n i f i c a n t l y ．A tt h es a m e t i m e ，t h eR h ls y s t e mw a s f o u n dt or e p r e s s

10、t h ea c t i v i t i e so f t h ef o u rT 3 S Sg e n e s a n d t h eL a ss y s t e mh a d n o e f f e c t ．T h e r e s u l t si n d i c a t e t h a tt h eR h la n d P s e u d o m o n a s Q u i n o l o n eS i g n a l ( P

11、Q S ) s y s t e m s p l a ya ni m p o r t a n t r o l ei nr e g u l a t i n gT 3 S Sg e n e e x p r e s s i o ni nP s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a ·I nt h e p r e v i o u s s t u d yo fo u rl a b ，w ec o n

12、s t r u c t e dat r a n s p o n s o nm u t a g e n e s i s l i b r a r y ,s e v e ! r a lm u t a n t s w e r e f o u n d t oi n c r e a s e d t h ee x p r e s s i o n o f p h z A 1i np r e s e n c e o f s u b —i n h i b

13、i t o r yt e t r a c y c l i n e ，i n c l u d i n gm u t a n ti nP A 0 0 1 1 ，ap r o b a b l e2 - O H —l a u r o y t r a n s f e r a s e t h a tc o n t r o lt h es y n t h e s i so fe e l l e n v e l o p e a n d o u t e

14、rm e m b r a n e ．I nt h i s s t u d y , g e n ek n o c k o u tm u t a n t o fP A 0 0 11 、Ⅳa sc o n s t r u c t e d ．T h e P A 0 0 11 m u t a n t e x h i b i t s 4 - f o l d i n c r e a s e ds u s c e p t i b i l i t i e

15、 s t ot e t r a c y c l i n e a n do t h e ra n t i b i o t i c s 。A tt h es a m et i m e ，e x p r e s s i o no f P A 0 0 1 1 W a sf o u n dt oi n c r e a s e o v e r t i m e i n t h e p r e s e n c e o f s u b —i n h i

16、b i t o r y t e t r a c y c l i n e a n d e r y t h r o m y c i nc o n c e n t r a t i o n ．M o r e o v e 0 i n t h ep r e s e n c eo f s u b —i n h i b i t o r yc o n c e n t r a t i o nt e t r a c y c l i n e ，l e v e

17、l sⅨl 諾S l ，l a s R ，r h l l , r h l R ，p q s H , p q s R ，r h l A ，l a s Ba n d p h z A l t r a n s c r i p t sw e r ee l e v a t e ds e v e r a lf o l d s r e s p e c t i v e l yi n c o m p a r i s o nw i t h t h e w i

18、 l d —t y p e l e v e l s ．T h e s ef i n d i n g s s u g g e s tt h a tP A 0 0 1 1 i si n v o l v e di nQ S s y s t e m a n ds u s c e p t i b i l i t yt oa n t i m i c r o b i a la g e n t si np a e r u g i n o s a 。P

19、A 0 0 11 c o u l d p l a ya r o l ea sa p o t e n t i a lt a r g e tf o r a n t i m i c r o b i a la g e n t s i nP a e r u g i n o s a -K e y w o r d s ：P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a ；Q u o r u m s e n s i n