辣蓼與牛耳楓中黃酮類(lèi)成分的提取及發(fā)酵工藝優(yōu)化研究.pdf

1、辣蓼為蓼科（Polygonaceae）蓼屬（Polygonum）植物Polygonum hydropiperLinn.的干燥全草。味辛，性溫；具有健脾化濕、祛風(fēng)化滯、散瘀止痛、解毒消腫、殺蟲(chóng)止癢等功效；臨床多用于痢疾、腸胃炎、腹瀉、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、跌打腫痛、功能性子宮出血；外用可治毒蛇咬傷、皮膚濕疹等。牛耳楓為虎皮楠科（Daphniphyllaceae）虎皮楠屬（Daphniphyllum）植物Daphniphyllum calycinum

2、Bench.的干燥帶葉莖枝。味苦、澀，性平，有毒。具有清熱解毒、祛風(fēng)活血、止痛消腫的功能，主治風(fēng)濕骨痛、瘡瘍腫毒、跌打骨折、毒蛇咬傷。
　　辣蓼與牛耳楓是民間防治胃腸道疾病的經(jīng)典中藥復(fù)方，已經(jīng)證實(shí)黃酮類(lèi)成分是其主要藥效成分。本文首先對(duì)辣蓼與牛耳楓藥材總黃酮提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，然后建立楓蓼復(fù)方的定性鑒別與定量分析方法。在此基礎(chǔ)上，采用微生物發(fā)酵技術(shù)對(duì)楓蓼復(fù)方進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，篩選發(fā)酵菌種，優(yōu)化發(fā)酵條件。通過(guò)分析發(fā)酵產(chǎn)物中黃酮類(lèi)化合物的含量

3、變化來(lái)評(píng)價(jià)發(fā)酵效果。旨在獲得廉價(jià)、高效、零污染的中藥復(fù)方發(fā)酵成品。具體研究?jī)?nèi)容如下：
　　1、以總黃酮含量為指標(biāo)，分別比較熱水提取法、超聲提取法、乙醇加熱回流法、索氏提取法的提取效率。在此基礎(chǔ)上，以正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化總黃酮的提取工藝。結(jié)果表明辣蓼總黃酮的最佳提取條件：乙醇濃度為60％，料液比為1：30，超聲提取時(shí)間為50min，超聲提取溫度為80℃，在此條件下總黃酮得率為53.3mg/g。牛耳楓總黃酮的最佳提取工藝參數(shù)：乙醇濃度為60

4、％，總料液比1：50，超聲提取時(shí)間40min，提取次數(shù)2次，在此條件下總黃酮得率為35.3mg/g。
　　2、以蘆丁、金絲桃苷為對(duì)照品，十二烷基硫酸鈉：正丁醇：己烷：水：甲酸（0.27:0.63:0.10:3:0.2）為展開(kāi)劑，以3% AlCl3為顯色劑，建立楓蓼復(fù)方藥材的薄層鑒別方法。在上述條件下，楓蓼復(fù)方在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定楓蓼復(fù)方中總黃酮含量，以蘆丁為對(duì)照品，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為

5、y=12.003x+0.0037，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999，在0.008～0.048mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。采用高效液相色譜法建立同時(shí)測(cè)定楓蓼復(fù)方中6種黃酮類(lèi)成分（蘆丁、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素、異鼠李素、山奈酚）的分析方法。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程依次為：蘆丁y=20785x-1885.8（R2=0.9998）；金絲桃苷y=19860x+5368.9（R2=0.9997）；槲皮苷y=16884x+6745（R2=0.9998）；槲皮素y=

6、32354x+1850（R2=0.9998）；異鼠李素y=38458x-8908（R2=0.9999）；山奈酚y=39924x-4444.3（R2=0.9999）。
　　3、分別比較枯草芽胞桿菌、地衣芽胞桿菌、黑曲霉、綠色木霉、少孢根霉、白腐菌、紅曲霉菌種對(duì)楓蓼復(fù)方的發(fā)酵效果，確定較優(yōu)菌種為枯草芽孢桿菌。在此基礎(chǔ)上，采用單因素試驗(yàn)法分別考察初始pH、溫度、濕度、發(fā)酵時(shí)間、菌量、培養(yǎng)基與水用量等因素對(duì)發(fā)酵效果的影響，確定最佳發(fā)酵條件