膠原膜負(fù)載CBD-bFGF修復(fù)大鼠外傷性鼓膜穿孔.pdf

1、背景：膠原是人體細(xì)胞外基質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)蛋白，已經(jīng)被研究作為鼓膜再生的支架材料。堿性成纖維生長(zhǎng)因子（bFGF）是一種多潛能的生長(zhǎng)因子，它可以促進(jìn)多種細(xì)胞和組織的分化和增殖。研究發(fā)現(xiàn)bFGF能加速鼓膜穿孔的愈合。為了結(jié)合膠原材料與bFGF雙方面的優(yōu)勢(shì)，并尋找到一種更合適的修復(fù)鼓膜穿孔的方法，我們使用一種人工修飾的bFGF，在其末端添加了一個(gè)膠原蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域（CBD），使其與膠原膜（CM）特定地結(jié)合，研究?jī)烧呓Y(jié)合使用對(duì)大鼠外傷性鼓膜穿孔的修復(fù)

2、作用。
　　方法：（1）體外實(shí)驗(yàn)部分：與商品化bFGF作對(duì)照，采用CCK-8方法，檢測(cè)CBD-bFGF促進(jìn)人皮膚成纖維細(xì)胞（HS-865）的增殖作用。然后將CBD-bFGF與膠原膜藕連，以BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)蛋白質(zhì)含量從而評(píng)估細(xì)胞因子與膠原膜的結(jié)合效率。（2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分：72只SD大鼠雙耳外傷性鼓膜穿孔后按修復(fù)材料分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別為CM-CBD-bFGF干預(yù)組（n=24），CM干預(yù)組（n=24），對(duì)照組（未修復(fù)）（n

3、=24）。另8只大鼠未穿孔未修復(fù)為假手術(shù)組。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中有8只大鼠分別于術(shù)后7天、14天和28天時(shí)進(jìn)行評(píng)估。通過(guò)顯微鏡大體觀察鼓膜愈合的情況，通過(guò)HE染色、Masson染色、免疫組織化學(xué)技術(shù)和透射電子顯微鏡檢查評(píng)估再生鼓膜的組織結(jié)構(gòu)，通過(guò)聽(tīng)性腦干反應(yīng)評(píng)估術(shù)后聽(tīng)力功能。
　　結(jié)果：（1）體外的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CBD-bFGF明顯促進(jìn)人皮膚成纖維細(xì)胞（HS-865）的增殖，與bFGF相比，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。CBD-bFGF與

4、膠原膜的結(jié)合率為（81.9±11.64％）比bFGF與膠原膜的結(jié)合率（72.3±12.01%）高，并且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)CM-CBD-bFGF組早期的鼓膜愈合率明顯高于CM組和空白組，且再生鼓膜外觀與正常鼓膜相近。組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)CM-CBD-bFGF組顯示了排列良好的三層組織結(jié)構(gòu)（上皮組織層、纖維組織層和粘膜層）。在觀察后期，中間纖維組織層更緊實(shí)，膠原纖維排列更規(guī)則，與正常鼓膜相近。C