孕期補(bǔ)充維生素D預(yù)防LPS誘發(fā)的小鼠流產(chǎn).pdf

1、目的：探討通過(guò)孕期補(bǔ)充維生素D對(duì)LPS誘發(fā)小鼠流產(chǎn)的影響。
　　方法：健康清潔級(jí) ICR小鼠（8-10周齡，其中雄鼠：28~30 g，雌鼠：24~26 g），飼養(yǎng)環(huán)境保持12小時(shí)晝夜節(jié)律，溫度維持在20~25℃，濕度維持在50±5%之間。小鼠在此環(huán)境下自由飲水飲食，合籠前進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。晚21:00按雌雄比例2:1進(jìn)行合籠，次日早7:00進(jìn)行雌鼠陰栓檢查。查到陰栓的雌鼠視為交配成功即孕鼠，記為孕期第0天即GD0。孕鼠在孕期第0

2、天(GD0)隨機(jī)分為4組：對(duì)照組，VitD3組，LPS組和VitD3+LPS組。VitD3組和VitD3+LPS組孕鼠于GD5至GD7每天經(jīng)灌胃給予25μg/kg的維生素D3乳化劑；對(duì)照組和LPS組于GD5-7給予等容量單純?nèi)榛瘎?；LPS組和VitD3+LPS組于GD7經(jīng)腹腔注射給予150μg/kg的LPS；對(duì)照組和VitD3組與GD7經(jīng)腹腔注射給予等容量的生理鹽水。GD8剖殺各組孕鼠，記錄每窩孕鼠子宮內(nèi)胚胎著床總數(shù)以及胚胎存活個(gè)數(shù)。發(fā)

3、生一個(gè)或一個(gè)以上胚胎丟失的即胚胎存活數(shù)小于胚胎著床數(shù)的記為流產(chǎn)孕鼠；無(wú)胚胎著床數(shù)或胚胎組織碎片的為未懷孕鼠，需將其從實(shí)驗(yàn)中剔除。最后分別計(jì)算四個(gè)組孕鼠流產(chǎn)率，并進(jìn)行比較。為研究VitD3對(duì)LPS引起母體內(nèi)炎癥反應(yīng)的影響，將孕鼠隨機(jī)分為六組（對(duì)照組，VitD3組，LPS2h組和VitD3+LPS2h組，LPS6h組和VitD3+LPS6h組）。GD7經(jīng)腹腔注射給予150μg/kgLPS和等容量生理鹽水2 h和6 h后分別剖殺各組孕鼠，收集

4、母鼠血清與子宮連胎。用ELISA法檢測(cè)孕鼠母體血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2、NO和PGF2α的蛋白水平，用免疫組織化學(xué)分析方法檢測(cè)子宮蛻膜細(xì)胞中COX-2、NF-κB p65和VDR的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：在LPS組中經(jīng)LPS處理后引起62.5%（10/16）的孕鼠發(fā)生流產(chǎn)；在VitD3+LPS組中進(jìn)行了維生素D3預(yù)處理后，流產(chǎn)率降低至14.3%（2/14）。通過(guò)小鼠流產(chǎn)模型實(shí)驗(yàn)中可得出，孕早期補(bǔ)充維生素D3可一定程度

5、降低LPS誘發(fā)的小鼠流產(chǎn)發(fā)生率。通過(guò)ELISA法檢測(cè)孕鼠血清中炎性因子TNF-α, IFN-γ,趨化因子MIP-2和NO的蛋白水平。LPS組母鼠血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2和NO的蛋白水平顯著高于對(duì)照組；VitD3+LPS組母鼠血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2和NO的蛋白水平顯著低于LPS組。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明通過(guò)孕早期補(bǔ)充VitD3可減輕LPS誘導(dǎo)的母體內(nèi)相關(guān)炎癥反應(yīng)。通過(guò)免疫組織化學(xué)分析法發(fā)現(xiàn)，LPS組母鼠子宮蛻膜細(xì)

6、胞中COX-2的表達(dá)顯著高于對(duì)照組；VitD3+LPS組中母鼠子宮蛻膜細(xì)胞中COX-2的表達(dá)顯著低于LPS組。通過(guò)ELISA法檢測(cè)孕鼠血清中PGF2α的蛋白水平，LPS組母體血清中PGF2α的含量顯著高于對(duì)照組；VitD3+LPS組中母體血清中PGF2α的含量顯著低于LPS組。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孕早期補(bǔ)充維生素D3可以減少LPS誘導(dǎo)母鼠子宮蛻膜細(xì)胞中COX-2的表達(dá)并且有效降低母鼠血清中PGF2α的含量。通過(guò)ELISA法檢測(cè)母體血清中I

7、L-10蛋白含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示單純維生素D3處理組中母體血清中IL-10蛋白含量與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異；LPS處理組中母鼠血清中IL-10的含量顯著高于對(duì)照組；VitD3+LPS組中IL-10含量顯著高于LPS處理組。該結(jié)果表明，維生素D可進(jìn)一步促進(jìn)LPS組中孕鼠母體血清中抗炎因子IL-10的升高。通過(guò)免疫組織化學(xué)法分析，VitD3組中母鼠子宮蛻膜細(xì)胞中VDR的核表達(dá)顯著高于LPS組和對(duì)照組；LPS組中母鼠子宮蛻膜細(xì)胞中NF-κB p6