拮抗芽孢桿菌的分離鑒定及其多樣性和系統(tǒng)發(fā)育分析.pdf

1、已有研究者對中藥源、乳酪、白酒糟醅、極端環(huán)境和土壤來源芽抱桿菌進(jìn)行了分類和資源調(diào)查研究，但尚未有對拮抗芽孢桿菌進(jìn)行分類和資源研究的報(bào)道。通過分類研究揭示拮抗芽抱桿菌的生物多樣性及其系統(tǒng)發(fā)育地位，對深入發(fā)掘、保存及合理利用芽孢桿菌種質(zhì)資源有重要的理論價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。本研究從中國江蘇省、黑龍江省、海南省和新疆維吾爾自治區(qū)采集到不同生境土樣28份，利用傳統(tǒng)方法，分離鑒定到1593個(gè)芽孢桿菌，并從中篩選出了545個(gè)對植物病原真菌（Sclerot

2、inia sclerotiorum）和病原細(xì)菌（Xanthomonas oryzae pv。oryzae）有良好抑菌活性菌株。
　　 從各省區(qū)不同地區(qū)挑選具有良好抑菌活性的芽孢桿菌330個(gè)，運(yùn)用ERIC-PCR擴(kuò)增其基因間重復(fù)序列，對指紋圖譜進(jìn)行聚類分析，結(jié)果顯示，在78％的相似度下各地區(qū)拮抗芽孢桿菌被分為若干群，最多的新疆阿克蘇地區(qū)被分為16個(gè)群，最少的海南地區(qū)被分為10個(gè)群，說明拮抗芽孢桿菌在各地的分布具有很好的多樣性。進(jìn)一

3、步分析數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，選出的拮抗菌大多數(shù)集中在解淀粉芽孢桿菌群（Bacillus amyloliquefaciensgroup）、枯草芽孢桿菌群（B.Subtilis group）、短小芽孢桿菌群（B.pumilus group）和巨大芽孢桿菌群（B.megatrium group）。對于不同省區(qū)的拮抗芽孢桿菌，南部主要以B.megatrium group為主，北部和西部主要以B.pumilus group為主，而東部由于分離菌株較少沒有找到

4、拮抗菌；同一省區(qū)新疆維吾爾自治區(qū)的不同地區(qū)，拮抗菌優(yōu)勢種群不一樣，南疆地區(qū)B.amyloliquefaciens group分布較少，而北疆地區(qū)B.megatriumgroup分布較少。不同生境對于拮抗芽孢桿菌的分布沒有特別影響。
　　 從330個(gè)具有良好抑菌活性的芽孢桿菌中，選取對病原真菌的抑菌圈達(dá)到25mm以上，對病原細(xì)菌的抑菌圈達(dá)到30mm以上的24株有較高抑菌活性的菌株，進(jìn)行形態(tài)學(xué)，生理生化學(xué)測定，并擴(kuò)增了其16S rR

5、NA和gyrB基因序列，結(jié)合它們的ERIC-PCR指紋圖譜聚類分析，我們發(fā)現(xiàn)，聚類分析結(jié)果與gyrB基因序列鑒定結(jié)果具有良好的一致性。以此說明利用ERIC-PCR指紋圖譜進(jìn)行多樣性分析具有可靠性。
　　 本研究同時(shí)還對西藏具有拮抗作用的菌株進(jìn)行了低溫適生菌篩選，結(jié)果找到2株（RJGP41和CJLC2）能在4℃下生長，25株能在10℃下生長良好的菌株，命名為低溫適生芽孢桿菌。結(jié)合促擬南芥生長和促玉米種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)，我們找到菌株RJG

6、P41，CJLC2，GBSC56和NMSL88有較好的促生長作用，且在低溫下也能穩(wěn)定促進(jìn)玉米生長。經(jīng)16S rDNA擴(kuò)增測序，將它們分別鑒定到種：RJGP41屬于B.simplex；CJLC2屬于B.megaterium；GBSC56屬于B.atrogheus；NMSL88屬于B.cereus。對27個(gè)低溫適生菌進(jìn)行抗菌譜測定，結(jié)果顯示LSSC3（B.subtilis）具有較強(qiáng)的抗菌作用，尤其對病原真菌。這些低溫菌具有耐低溫和促生、抗菌