中國遼寧地區(qū)漢族人群PADI4-94T-C單核苷酸多態(tài)性與類風濕關節(jié)炎發(fā)病關聯(lián)性的研究.pdf

1、前言：
　　類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一種以關節(jié)滑膜炎癥為特征的慢性全身自身免疫性疾病，病理上具有對稱性、進行性及侵蝕性的多關節(jié)慢性炎癥。雖然類風濕關節(jié)炎的確切病因和發(fā)病機制尚不清楚，但一般認為類風濕關節(jié)炎是由多種遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結果。肽酰精氨酸脫亞胺基酶（Peptidylarginine deiminase，PADI）是精氨酸轉化為瓜氨酸過程中的關鍵酶，瓜氨酸化后的蛋白質往往可以

2、改變其分子構象，從而改變蛋白質的生化活性，進而可以參與多種生理和病理反應。
　　近些年，許多研究者以不同國家地區(qū)的人群為基礎，圍繞PADI4基因rs2240340多態(tài)性與類風關濕節(jié)炎是否相關做了大量研究，對二者關系的認識不斷深入，但研究結果還有一些不明確或不一致的地方，仍需進一步探究。為了解中國漢族人群特別是遼寧地區(qū)漢族人群PADI4基因多態(tài)性與類風濕關節(jié)炎的關聯(lián)性，本研究以200例類風濕關節(jié)炎患者和200例非類風濕關節(jié)炎患者為研

3、究對象，進行了病例對照研究，將可能影響類風濕關節(jié)炎的因素進行了單因素分析，確定其危險因素后，進一步運用叉生分析，將其分別與PADI4-94基因型進行交互作用分析，為類風濕關節(jié)炎發(fā)生機制的遺傳基因證據(jù)提供了可能性，也為制定防治措施提供了依據(jù)。
　　對象與方法：
　　一、研究對象的選擇
　　病例組是沈陽市某醫(yī)院的類風濕關節(jié)炎患者200例，均經(jīng)過嚴格的診斷標準確診為類風濕關節(jié)炎，在沈陽市某醫(yī)院體檢中心，連續(xù)收集200例非類風

4、濕關節(jié)炎患者作為對照組，并保證病例組和對照組例數(shù)相等且非匹配設計，對照組人群均經(jīng)過血清類風濕因子(rheumatoid factor，Rf)和抗核抗體(antinudear antibody，ANA)檢測，且結果均為陰性，并無類風濕關節(jié)炎臨床表現(xiàn)，已確定為非類風濕關節(jié)炎患者。所有研究對象均在遼寧省居住5年以上且無血緣關系的漢族人群，排除結締組織病和關節(jié)性疾病。所有臨床和實驗室資料的收集以及外周血樣的采集均獲得研究對象的知情同意，簽知情同

5、意書。
　　二、調查內(nèi)容
　　(1)研究對象的年齡、身高、體重、學歷等一般情況。
　　(2)研究對象是否攝入奶制品、每周吃鈣片的量、是否每周吃豆制品、是否每周吃海產(chǎn)品等飲食狀況，是否飲酒、吸煙等。
　　(3)研究對象是否有肝炎、糖尿病、高血壓、缺血性心臟病、消化道潰瘍，是否有過敏等疾病史。
　　三、診斷標準和測量方法
　　診斷標準:所有患者均符合1987年美國風濕病學會(American Colleg

6、e ofRheumatology，ACR)的類風濕關節(jié)炎分類標準[5]。診斷標準為:(1)晨僵至少1h（持續(xù)＞6w）;(2)3個或以上關節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(3)腕、掌指關節(jié)或近端指間關節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(4)對稱性關節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(5)皮下結節(jié);(6)手X線平片改變;(7)類風濕因子滴度＞1∶32。符合上述標準4項及以上即診斷為類風濕關節(jié)炎。
　　四、實驗室檢查
　　血標本采集:所有研究對象均于清晨空腹抽取靜脈血5

7、mL，0.2％ EDTA-Na2抗凝，2℃～8℃保存，72 h內(nèi)提取外周血DNA。
　　DNA的提取:取樣本的全血5 ml，用Qiagen公司的DNA提取試劑盒提取基因組DNA，-70℃凍存待用。
　　-LDR法檢測方法:主要應用連接酶檢測反應(ligase detection reaction，LDR)技術。
　　五、統(tǒng)計學方法
　　用Excel建立數(shù)據(jù)，兩人進行數(shù)據(jù)的錄入和核查比對，運用SPSS16.0軟件分

8、析，統(tǒng)計學上的顯著性水平為α=0.05，根據(jù)不同的情況采用不同的統(tǒng)計方法進行描述分析，用Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗群體代表性，不同基因型及等位基因頻率比較均采用x2檢驗，OR值及其95％可信區(qū)間表示。進行單因素分析后，再用多因素非條件Logistic回歸分析，環(huán)境因素與基因交互作用的分析運用叉生分析進行。
　　結果：
　　PADI4-94基因位點的等位基因頻率在對照組中的分布符合Hardy-Weinberg平

9、衡(P＞0.05)。PADI4-94基因位點的基因型、等位基因頻率，在病例組與對照組人群中的分布無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本組研究按不同性別分層比較發(fā)現(xiàn)，PADI4-94基因位點在對照組與病例組的男女性間分布差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。單因素分析結果顯示，BMI、腹型肥胖、住宅情況、有無取暖、通風受冷、飲食是否規(guī)律、食用豆制品、食用海產(chǎn)品、是否得過肝炎和過敏在病例組與對照組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);學歷、基因型、

10、住宅有無電梯、是否飲用牛奶、是否服用鈣片、是否飲酒、是否吸煙、是否得過糖尿病、是否得過高血壓、是否得過心臟病在病例組與對照組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。多因素非條件Logistic回歸分析顯示，在校正其他因素的影響后，最終進入回歸方程的5個影響因素分別為BMI、腹型肥胖、住宅情況、取暖、通風受冷(P＜0.05)。PADI4-94基因位點的基因型分別與BMI、腹型肥胖、通風受冷進行交叉分析顯示均有交互作用。
　　討論：<

11、br>　　一、PADI4-94基因易感性分析
　　比較兩組等位基因頻率對類風濕關節(jié)炎易感性的影響無統(tǒng)計學意義;比較兩組的該位點基因型對類風濕關節(jié)炎的危險性沒有統(tǒng)計學意義，顯示含有TC和CC的個體患類風濕關節(jié)炎的易感性未見升高，表明PADI4-94基因與類風濕關節(jié)炎發(fā)病沒有關聯(lián)。
　　二、危險因素和PADI4基因型在類風濕關節(jié)炎發(fā)生中的交互作用
　　本次研究超重組和肥胖組為一個因素，研究結果表明其超重和肥胖是類風濕關節(jié)炎

12、發(fā)病的重要危險因素，同時腹型肥胖也是危險因素。出現(xiàn)協(xié)同作用，可能是因為脂肪細胞作為一種內(nèi)分泌細胞可以分泌出多種脂肪因子，這種因子可能易發(fā)炎癥反應，一旦發(fā)生炎癥反應，就可以導致含PADI4細胞死亡，細胞內(nèi)的鈣濃度達到一定的濃度，就可以活化PADI4，進而瓜氨酸化，瓜氨酸化后的蛋白質往往可以改變其分子構象，從而改變蛋白質的生化活性，進而可以參與多種生理和病理反應。肥胖人群有較多脂肪細胞，更能促使類風濕關節(jié)炎的發(fā)生。
　　本次研究顯示通

13、風受冷是類風濕關節(jié)炎發(fā)病的危險因素，通風則容易受冷，受冷的人群可能發(fā)生類風濕關節(jié)炎危險性比正常人高?？赡苁且驗楹渥鳛榇碳ひ蜃?，迫使人體的免疫系統(tǒng)做出相應調節(jié)抵制該刺激，免疫系統(tǒng)容易被破壞，也容易促發(fā)類風濕關節(jié)炎發(fā)生。在相加效應模型中，呈現(xiàn)協(xié)同作用，寒冷是不良的環(huán)境因素，降低人體免疫力，容易誘發(fā)一些致病因子，導致類風濕關節(jié)炎的發(fā)生。
　　結論：
　　1.提示PADI4-94T/C位點基因多態(tài)性與類風濕關節(jié)炎發(fā)病可能無關聯(lián)性。