尋常型銀屑病皮損組織中Nestin、NF-κB及STAT3蛋白表達的檢測.pdf

1、背景：
　　銀屑病是一種慢性的、易復發(fā)的與基因遺傳、多種環(huán)境刺激誘導的自身免疫性皮膚病，以細胞的炎癥和增生為特征而表現(xiàn)為丘疹、紅斑、鱗屑的皮膚病。銀屑病的發(fā)病機制雖尚未十分明確，已知銀屑病表皮干細胞（stem cell）是銀屑病表皮增殖的根源，Nestin是其干細胞的標志之一。此外，NF-κB核轉綠因子可被炎癥因子IL-6，細胞增殖及 ROS等激活，此激活的炎癥因子可激活JAK-STAT信號轉導，尤其是STAT3的磷酸化可靶向提高

2、c-myc/cyclin D1的表達而促進細胞增殖。因此，應用藥物或其它措施抑制干細胞或抑制NF-κB及STAT3的表達上調問題已成為治療銀屑病的靶點。我們在此實驗中擬對尋常型銀屑病標本和從整形科獲得的正常皮膚標本對Nestin、NF-κB及STAT3的免疫反應性或表達進行比較。NF-κB(nuclear factor-κB)是一種真核細胞轉錄因子，可被炎癥和增殖激活，可調控細胞因子、趨化因子和粘附分子等在皮膚組織中表達。信號轉導和轉錄

3、激活因子3（signal transducer and activator of transcription,STAT3）。由于Nestin、NF-κB、STAT3在正常表皮中均表達于基底層，基底層是角質形成細胞增殖發(fā)生的重要部位，提示它們與細胞增殖、炎癥密切相關。本研究采用免疫組化的方法檢測Nestin、NF-κB、STAT3在尋常型銀屑病變標本和正常皮膚標本中的表達定位,闡述其在銀屑病變中的作用機制。
　　目的：
　　擬

4、探討和比較尋常型銀屑病與正常皮膚的Nestin、NF-κB和STAT3的表達定位和表達水平。
　　臨床資料
　　收集2013年12月至2014年4月我院皮膚科門診部或者住院部尋常性銀屑病變標本和整形外科患者正常皮膚標本各14例。其中14例尋常型銀屑病變標本均經組織病理學確診。取到的所有組織標本送于鄭州大學醫(yī)學院分子細胞生物學研究中心，本研究經我院倫理委員會批準，患者均簽了署知情同意書。
　　方法：
　　各組織細胞

5、標本于4％多聚甲醛固定、吹干及透化，應用SP試劑盒，檢測Nestin, NF-κB和STAT3在尋常型銀屑病變標本和正常皮膚標本的表達定位水平，各組織標本固定、脫水、透明。同時用0.3%H2O2處理入水石蠟，以抑制內源性過氧化物酶（HRP）的活性，標本經石蠟包埋處理后，行蠟塊切片。應用Nestin抗體、NF-κB抗體和STAT3抗體，對皮損組及正常對照組進行以Nestin抗體、NF-κB抗體、STAT3抗體進行免疫組織化學染色，進行DA

6、B顯色并采圖，同時以PBS替代一抗作為實驗的陰性對照。
　　統(tǒng)計學分析
　　_本研究計量資料以（x±s）表示,兩組間比較采用雙側t檢驗, P<0.05差異具有統(tǒng)計學意義, P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計學意義，所有統(tǒng)計學分析均應用SPSS(Statistical Product and Service Solutions)17.0軟件進行處理。
　　結果：
　　Nestin的免疫反應性定位于表皮基底層中個別干細胞的

7、胞質內，NF-κBp65和 STAT3的免疫反應性(Immunoreactivity,IR)表達定位于表皮基底細胞和棘層細胞的胞核及胞質。尋常型銀屑病皮損中Nestin-IR、NF-κB-IR和STAT3-IR均明顯高于正常皮膚組織，差異有統(tǒng)計學意義。（ Nestin（167.51±0.05 vs114.38±0.03）、NF-κBp65（127.48±0.12 vs101.27±0.04）和STAT3（196.34±0.09 vs12