尋常型銀屑病皮損中T-cadherin和P-cadherin的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、目的：旨在通過(guò)檢測(cè)T-鈣粘蛋白(T-cadherin)和P-鈣粘蛋白(P-cadherin)在尋常型銀屑病(Psoriasis vulgaris，PV)患者皮損組織和正常表皮組織中表達(dá)的差異性，分析其在PV患者皮損組織中的表達(dá)與PV患者臨床資料之間的關(guān)系，以及它們?cè)赑V患者皮損組織中表達(dá)的相關(guān)性，探討銀屑病的病因及發(fā)病機(jī)制。 方法：利用SP免疫組織化學(xué)法檢測(cè)38例PV患者皮損組織和15例正常表皮組織中T-cadherin和P-c

2、adherin的表達(dá)水平。 ①PV患者皮損標(biāo)本的取材：常規(guī)消毒，局部浸潤(rùn)麻醉，選擇未經(jīng)治療的，成熟的皮損，用手術(shù)刀沿皮紋方向作0.5cm×1cm的梭形切口，切忌鉗取所取組織。 ②固定：切下的組織立即放入4％多聚甲醛溶液的小瓶中固定，固定至少30s后修成厚度不超過(guò)1.5mm的組織塊標(biāo)本。 ③脫水和浸蠟：固定好的標(biāo)本放入丙酮液中3～4次，每次3～8min脫水，脫好水的標(biāo)本放入已熔化的石蠟中3～5min。按要求包埋和修

3、整蠟塊。 ④常規(guī)4 μm連續(xù)切片，黏附于多聚賴氨酸溶液(Poly-L-Lysine Solution)處理后的玻片上，切片常規(guī)脫蠟水化后，將切片放入0.01m枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0)，置于高壓鍋(工作壓力為90 KPa/cm2)，電爐加熱至沸騰5 min，取出切片冷卻。 ⑤清水沖洗5 min后進(jìn)入新鮮配制的3％H2O2甲醇液，室溫10 min，以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。滴加10％正常馬血清封閉液，室溫20 min

4、后甩去多余液體，勿洗； ⑥滴加相應(yīng)一抗，37℃，孵育1 h，PBS沖洗，3min×3次；滴加相應(yīng)生物素標(biāo)記二抗，37℃，孵育20 min，PBS沖洗，3 min×3次； ⑦滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育10～30分鐘；PBS沖洗，3 min×3次； ⑧DAB顯色，室溫下，鏡下控制顯色時(shí)間2 min；蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，封片。 ⑨以胞膜或細(xì)胞間出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，按每張切片的陽(yáng)性細(xì)

5、胞比例及著色深淺劃分-、+、++、+++四級(jí)，基本不著色或著色細(xì)胞少于5％為陰性(-)；著色淺淡或著色細(xì)胞占5％～25％為弱陽(yáng)性(+)；著色適中或著色細(xì)胞占26％～50％為中度陽(yáng)性(++)；著色深或著色細(xì)胞大于50％為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。 ⑩所有病例數(shù)據(jù)均以統(tǒng)一的調(diào)查表進(jìn)行收集，用SPSS 12.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行分析。兩個(gè)樣本率之間的差異用X2檢驗(yàn)，等級(jí)資料的兩樣本比較用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，皮損處T-cadherin和P-ca

6、dherin水平的比較采用Kendalls tau-b等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1．T-cadherin在PV皮損組織和正常表皮組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為26.31％、100.00％，二者比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2檢驗(yàn)P<0.01)； 2．P-cadherin在PV皮損組織和正常表皮組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為78.95％、15.38％，二者比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X

7、2檢驗(yàn)P<0.01)； 3．T-cadherin在PV皮損組織中的表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)，與患者的瘙癢感及病程的分期無(wú)關(guān)，但與家族史有關(guān),T-cadherin在有家族史PV皮損中的表達(dá)強(qiáng)度低于無(wú)家族史PV，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(秩和檢驗(yàn)P<0.05)； 4．P-cadherin在PV皮損組織中的表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)，與患者的瘙癢感及有無(wú)家族史也無(wú)關(guān)，但與病程的分期有關(guān)，P-cadherin在進(jìn)行期PV皮損中的表達(dá)強(qiáng)度高

8、于穩(wěn)定期PV和消退期PV，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(秩和檢驗(yàn)P<0.05)； 5．T-cadherin和P-cadherin在PV患者皮損組織中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān) (Kendalls tau-b等級(jí)相關(guān)分析tau-b=0.461，P<0.01)。 結(jié)論： 1．T-cadherin在PV患者皮損組織中的表達(dá)水平明顯低于正常表皮組織，提示T-cadherin可能在PV的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用； 2．P-cadherin在

9、PV患者皮損組織中的表達(dá)水平明顯高于正常表皮組織，提示P-cadherin的異常表達(dá)與其角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖有關(guān)； 3．T-cadherin在PV皮損組織中的表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)，與患者的瘙癢感及病程的分期無(wú)關(guān)，但與家族史有關(guān)，T-cadherin在有家族史PV皮損中的表達(dá)強(qiáng)度低于無(wú)家族史PV，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(秩和檢驗(yàn)P<0.05)，提示家族遺傳背景可能是銀屑病易感性因素； 4．P-cadherin在PV皮損組織中的

10、表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)，與患者的瘙癢感及有無(wú)家族史也無(wú)關(guān)，但與病程的分期有關(guān)，P-cadherin在進(jìn)行期PV皮損中的表達(dá)強(qiáng)度高于穩(wěn)定期PV和消退期PV，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(秩和檢驗(yàn)P<0.05)，可能與進(jìn)展期PV凋亡受抑制，增殖更活躍有關(guān)，標(biāo)志著表皮增殖動(dòng)力學(xué)紊亂； 5．T-cadherin和P-cadherin在PV患者皮損組織中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，提示兩者可能存在著一定的內(nèi)在聯(lián)系。兩者共同的表達(dá)結(jié)果導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞(kera